食品中亚硝酸盐的测定.doc

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1、实验二食品中亚硝酸盐的测定一、实验目的与要求掌握盐酸萘乙二胺法测定食品中亚硝酸盐的原理、操作步骤、注意事项二、实验原理样品在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色的染料，于最大吸收波长538nm下测吸光度值A,与标准系列比较定量。三、实验仪器及试剂1.仪器：分析天平、722分光光度计2.亚铁氰化钾溶液：称取106.0g亚铁氰化钾（[K4Fe6(CN)·3H2O]），用水溶解后，稀释至1000mL。3．乙酸锌溶液：称取22.0g乙酸锌（[Zn(CH3C00)2·2H20]），加3mL冰乙酸溶于水，并稀释至100mL。4．饱和硼砂溶液：称取5.

2、0g硼酸钠(Na2B07·10H20)，溶于100mL热水中，冷却后备用。5．对氨基苯磺酸溶液(4g/L)：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100mL20％的盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。6．盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）：称取0.2g盐酸萘乙二胺，溶于100mL水中，避光保存。7．亚硝酸钠标准溶液（0.2g/L）：精密称取0.1000g于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入500mL容量瓶中，并稀释至刻度。8．亚硝酸钠标准使用液（20µg/mL）：临用前，吸取10mL0.2g/L亚硝酸钠标准溶液，置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度。.四、实验步骤（1）样品前

3、处理1.取样：准确称取5.0g经绞碎、混匀的样品，置于50mL烧杯中。2.沉淀蛋白质：加12.5mL硼砂饱和溶液，搅拌均匀，以70℃左右的水约300mL将样品洗入500mL容量瓶中，置沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温；一面转动一面加入5mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。3．过滤：加水定容，放置0.5h，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤，弃去初滤液30mL，滤液备用。（2）标准曲线的绘制和样品的测定1.移取样品溶液20mL于25mL具塞比色管中。加1ml对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3~5min。加0.5mL盐酸萘乙二胺溶液，进而加水定容至25

4、mL，混匀，静置15min。以空白零点，于波长538nm处测吸光度A。2．标准曲线的绘制：分别吸取0、0.1、0.3、0.5、0.75mL亚硝酸钠标准应用液分别置于25mL具塞比色管中。以下同样品分析手续进行显色并绘制标准曲线。六、数据记录及结果计算样品中亚硝酸盐按下式计算：A                X= ———————×1000                          V2               m×——×1000V1式中：X—试样中亚硝酸盐的含量（mg/kg）；V1—试样处理液总体积（mL）；V2—测定用样液体积（mL）；m—试样质量（g）；A—

5、试样测定液中亚硝酸盐的质量（µg）。七、注意事项1．盐酸萘乙二胺有致癌作用。2．显色后稳定性与室温有关，一般显色温度为15~30℃时，在20~30min内比色为好。3．硼砂饱和液的作用：①吸收亚硝酸盐的NO2，使亚硝酸盐的总量不会因加热而减少；②蛋白质沉淀剂。4．亚铁氰化钾溶液和乙酸锌（可用硫酸锌代替）作用：蛋白质沉淀剂。原因：亚铁氰化钾溶液和乙酸锌反应，生成亚铁氰化锌沉淀，从而与蛋白共沉淀。5．清液用滤纸过滤后，要弃去初滤液30mL。原因：滤纸中含有少量铵盐，弃去初滤液是为了除去滤纸中铵盐的干扰。