宝诚实时荧光定量PCR培训.ppt

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1、荧光定量PCR原理常用名词概念1，扩增曲线2，荧光阈值3，Cq值：达到设定阈值荧光强度时所经过的循环数。荧光定量PCR原理荧光定量PCR原理荧光定量PCR原理扩增曲线图示荧光定量PCR原理荧光定量PCR原理荧光定量PCR原理荧光定量PCR有效性的确认相关系数（R2）：大于0.98标准曲线斜率：-3.32扩增效率：95%-105%Cq值有意义范围：15-35个循环荧光定量PCR的应用荧光定量PCR常用标记方法SYBRGreen标记方法SYBRGreen工作原理SYBRGreen标记方法Taqman探针法原理Taqman探针法原理Taqman探针法相对定量分析相对定量结果分析CFX96

2、产品介绍CFX96的特点：快速–快速升降温–即插即用，无需校正，–软件使用方便，无需设定反应板简便–模块化设计，方便维护–软件操作方便灵活–多台仪器连接–多种分析模式CFX96的特点CFX96能快速得到实验结果安装简便，出厂即经过校正30分钟得到很好的实验结果温度梯度功能，快速优化实验条件最多可以同时检测5个靶基因，提高检测通量，节约样品多次实验可以整合在一起，进行数据分析和处理整合的基因表达分析功能，无需导出数据即能得到基因表达的结果快速CFX96使用简便长寿命LED光源和一体化检测器，寿命长，性能稳定10µl反应体系，即能得到准确的结果实验结束后，实验结果将作为附件自动发送到电

3、子邮箱，随时随地分析结果噪音低，使用安静试剂和耗材开放，无需特别的试剂和消耗品简便CFX96能满足不同用户的应用需求软件简单，快速编写程序和分析结果可以使用“ExpressLoad”功能，快速开始实验,样品信息可以在运行前、运行中或运行后输入可以按照使用者的需求分析、显示和导出数据，多种分析模式可选，可以显示图形和表格SYBRGreen/FAM快速扫描模式，缩短运行时间扩展检测通量，一台电脑可以同时运行4台仪器提供安全版软件，记录仪器运行信息灵活CFX96的亮点高性能PCR仪，出色的温度控制性能领先的光学检测技术，真正5通道检测简单易用，功能强大的软件杰出的温度控制性能CFX96采

4、用C1000基座，精确控温升降温速度快均一性好快速设定时间，10秒钟即能稳定在设定的温度Maxramprate5oC/secTempAccuracy±0.2oCTempUniformity±0.4oCin10secTempRange0-100oC“蜂巢式”反应模块*Bio-RadPatentPending专利的“蜂巢式”反应模块确保快速的升降温速度保持很好的温度均一性，即使在升降温过程中也是如此温度均一性温度探头TimetoTemperature不同孔之间保持相同的升降温速度，有很好的温度均一性过冲量小，防止非特异性扩增，提高扩增效率运行时间的比较快速升降温,缩短了运行时间其他快速

5、PCR仪器，需要特殊的试剂和耗材，优化的条件，才能实现快速PCR的功能5oC/secmaxramprateAccuracy:+/-0.2oC,10secUniformity:+/-0.4oC,10sec6oC/secmaxramprateAccuracy:+/-0.2oC,Uniformity:+/-0.4oC,??sec温度梯度功能合适的退火温度，对于PCR的特异性和扩增效率非常重要，特别是对于计算实时荧光PCR结果的精确定量温度梯度功能只要运行一次实验，就能找到最合适的退火温度条件温度梯度温差范围24°C从后往前逐渐递减（最后排温度最高）温度梯度范围30-100°C“动态变温”

6、–所有的反应孔在同一个时刻到达设定的目标温度，保持相同的孵育时间步进马达控制光梭的移动先进的控制技术，减少移动部件的磨损，操作更稳定专利的精确定位技术，误差控制在3um之内，精确控制光梭的温度，确保均一的激发和检测先进的光梭移动技术多种扫描模式全通道扫描模式每个通道，每个样品采集200个数据点对最后100数据点进行均一化处理每个数据点的时间为2毫秒快速扫描模式（FAM/SYBRGreen）每个样品采集80个数据点对最后50数据点进行均一化处理每个数据点的时间为1.1毫秒LEDLED的原理LED是light-emittingdiode的缩写，在某些半导体材料的PN结中，注入的少数载流

7、子与多数载流子复合时会把多余的能量以光的形式释放出来，从而把电能直接转换为光能。PN结加反向电压，少数载流子难以注入，故不发光。这种利用注入式电致发光原理制作的二极管叫发光二极管，通称LED。LED的寿命有多长？20,000-30,000小时~5,000次实验（熔点曲线）~40,000次实验（无熔点曲线）数据采集模式ModeChannel(s)ScanTime(sec)AllChannels1-512SYBR/FAMOnly13FRET63三种数据采集模式SYBR/F