巨峰葡萄组织培养快繁技术研究.doc

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1、巨峰葡萄组织培养快繁技术研究摘要：采用巨峰匍萄腋芽茎段进行组织培养繁冇技术试验。结果表明，无菌腋芽茎段诱导丛生芽较适宜的培养基组成为1/2MS+0.03〜1.0mg/LNAA+I.0mg/L6・BA,较适宜的根分化培养基纟R成为l/2MS+().lmg/LIAA,组培的环境条件是温度22〜25°C、每日光照14小时和光照强度1800〜2000Lxo关键词：巨峰匍萄；腋芽茎段；组织培养屮图分类号：S663」文献标识码：A文章编号：1002・2910(20II)02・0006・03葡萄(Vi(isviniferaLinn.)为葡萄科(Vita

2、ce-ae)葡萄属(VitisLinn)多年生藤木植物，世界栽培面积达1000/Jhm2,占世界水果产量的30%以上。仅次于柑桔居第二位。葡萄除了鲜食外，可用于酿酒、制干和制汁等，还可作为食品T业原料，又是美化庭园楼阁、绿化荒山碱滩的观赏和绿化树种。生产上葡萄苗木通常采川枝条打插法繁冇，笔者利用纽•织培养法将腋芽茎段培冇成为试管苗和植株。现报告如下。1材料与方法1.1试验材料与消毒将通过休眠期的巨峰葡萄枝条插入沙床屮催芽，待新梢长出3节以上时，剪取嫩枝，除去幼叶，剪成1.0〜1.5cm长的茎段，每段带有腋芽或顶芽，作为组培外植体。取材时用

3、75%的酒精棉球擦洗剪刀，对盛放嫩枝的器械消毒，减少细菌污染。用白来水冲洗茎段2〜3小时后，放在无菌水屮，置于冰箱内，温度4°C左右处理4小时，取出，用自来水加0.02%的洗洁精浸泡10分钟，摇动，洗净材料表面的菌物。将材料转入干净的三角瓶屮，加入75%的酒精，浸泡杀菌20秒钟，再用蒸懾水漂洗一次，转入经过高压消毒的三角瓶屮，加入0.1%的升汞溶液，浸泡杀菌8分钟，摇动三角瓶，使升汞与材料充分接触，取出用蒸馆水冲洗4〜6次，每次1〜2分钟，除去残留的升汞。1.2接种方法与丛生芽的诱导芽分化培养基的配制，以1/2MS为基木培养基，即用MS的

4、大量元素的一半，再附加0.03〜O.IOmg/LNAA和0.5〜1.0mg/L6-BA,配制6种培养基(表1),用1.0mol/L的NaOH调节pH值至5.8,加热到80°C时加入琼脂粉4.0g/L,煮沸后分装于100ml的三角瓶屮制成培养基，用膜封口，在高压锅屮高压灭菌25分钟后备用。茎段消毒后，放在消毒滤纸上吸干水分，于茎段原下切面之上().5cm左右处切一新切面，使Z成为0.5cm左右的小段，每段要有芽，分别接种于6种芽分化培养基上。根据叶芽茎段在不同培养基上诱导丛生芽情况，筛选出适宜的诱导芽分化培养基和外植体，在温度22・25%、

5、每LI光照14小时、光照强度18OO-2OOOLX条件下培养诱导不定芽。1.3丛生芽根分化的诱导设置生根培养基3种。丛生芽长1.0〜1.5cm时切取丛生芽，接种在3种诱导根分化的1/2MS培养基上(表2),每三角瓶培养基上接种3〜5个，用膜封口，培养条件同诱导丛生芽条件。1.4试管苗的移栽在三角瓶根分化培养基上已生根的匍萄小植株，揭去瓶口封膜在培养室中炼苗7〜10天，茎杆逐渐变红，叶片油亮并形成保护组织，部分苗梢部伸出瓶口。将此组培小苗取出，洗净根部附着的培养基，移栽到灭过菌的蛭石和珍珠岩(1:1)的基质屮，浇透水，用翔料薄膜盖好，在膜上

6、打些小孔，利于通气，置于温室屮，一周后逐渐揭去册料膜，二周后植株开始长出新叶，根开始伸长且长出新根。将组培苗连同基质一起移入盆屮或苗圃屮。2结果与分析2」丛生芽诱导效果腋芽茎段在芽分化培养基上培养15天，产生绿色不定芽，再经一周时间长成丛生芽，不同培养基的诱导效果见表3。6种芽分化培养基对窗萄腋芽茎段发生不定芽的诱导率75%〜100%,不定芽发生数量以D和E两种芽分化培养基(l/2MS+0.03mg/LNAA+1.0mg/L6-BA和l/2MS+0.05mg/LNAA+l.0mg/L6-BA培养基)诱导出的为多，分别是8个和6个。但不定芽

7、的生长情况以F培养基(1/2MS+0.10mg/LNAA+1.0mg/L6-BA培养基)较好。2.2根的诱导效果切取的丛生芽接种在根分化培养基上，经过10天的培养，在单芽茎段基部产生愈伤组织，随后分化出了幼根，如表4°S1、S2和S3三种培养基屮，以S2根分化培养基(1/2MS+0.1mg/LIAA培养基)诱导出根效果报好，诱导率达到100%,平均生根条数4.7条°Sl(l/2MS+0.1mg/LIAA+0.05mg/LNAA)和s3(l/2MS+0.05mg/LNAA)培养基的诱导率分别为64%和71%,平均生根条数分别为2.5条和3.

8、0条。2.3无菌植株的建立茎段带菌是建立无菌系的障碍。当叶芽茎段经过75%酒精杀菌20秒、0」％的升汞溶液杀菌8分钟示，未能彻底解决茎段带菌问题，接种于培养基第4天，在茎段周围可见菌落,而远离