o型口蹄疫正向间接血凝抗原使用说明书1

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1、O型口蹄疫正向间接血凝抗原使用说明书一、原理用已知血凝抗原检测未知血清抗体的试验，称为正向间接血凝试验（IHA）抗原与其对应的抗体相遇，在一定条件下会形成抗原复合物，但这种复合物的分子团很小，肉眼看不见。若将抗原吸附（致敏）在经过特殊处理的红细胞表面，只需少量抗原就能大大提高抗原和抗体的反应灵敏性。这种经过口蹄疫纯化抗原致敏的红细胞与口蹄疫抗体相遇，红细胞便出现清晰可见的凝集现象。二、适用范围主要用于检测O型口蹄疫免疫动物血清抗体效价。三、试验器材1、96孔1100V型医用血凝板，与血凝板大小相同的玻板2、微量移液器（50微升25微升）取液塑咀3、微量震荡器4、O型口蹄疫血凝抗原

2、5、O型口蹄疫阴性对照血清6、O型口蹄疫阳性对照血清7、稀释液8、待检血清（每头约0.5ml血清即可）56℃水浴灭活30分钟四、试验方法1、加稀释液在血凝板上1-6排的1-9孔；第7排的1-4孔第6-7孔；第8排的1-12孔各加稀释液50微升。2、稀释待检血清取1号待检血清50微升加入第1排第1孔，并将塑咀插入孔底，右手拇指轻压弹簧3-4次混匀（避免产生过多的气泡），从该孔取出50微升移入第2孔，混匀后取出50微升移入第3孔……直至第9孔混匀后取出50微升丢弃。此时第1排1-9孔待检血清的稀释度（稀释倍数）依次为：1:2(1)、1:4(2)、1:8(3)、1:16(4)、1:32

3、(5)、1:64(6)、1:128(7)、1:256(8)、1:512(9)。取2号待检血清加入第2排；取3号待检血清加入第3排……均按上法稀释，注意：每取一份血清时，必须更换塑咀一个。3、稀释阴性对照血清在血凝板的第7排第1孔加阴性血清50微升，对倍稀释至第4孔，混匀后从该孔取出50微升丢弃。此时阴性血清的稀释倍数依次为1:2-1:16。第6-7孔为稀释液对照。4、稀释阳性对照血清在血凝板的第8排第1孔加阳性血清50微升，对倍稀释至第12孔，混匀后从该孔取出50微升丢弃。此时阳性血清的稀释倍数依次为1:2-1:4096。5、加血凝抗原被检血清各孔、阴性对照血清各孔、阳性对照血清

4、各孔、稀释液对照孔均各加O型血凝抗原（充分摇匀，瓶底应无血球沉淀）25微升。6、震荡混匀将血凝板置于微量振荡器上2-3分钟，如无振荡器，用手轻拍混匀亦可，然后将血凝板放在白纸上观察各孔红血球是否混匀，不出现血球沉淀为合格。盖上玻板，室温下静置2-3小时判定结果，也可延至翌日判定。7、判定标准移去玻板，将血凝板放在白纸上，先观察阴性对照血清1:16孔，稀释液对照孔，均应无凝集（血球全部沉入孔底形成边缘整齐的小圆点），或仅出现“+”凝集（血球大部分沉入孔底，边缘稍有少量血球悬浮）。阳性血清对照1:2-1:256各孔应出现“++++～++”凝集为合格（少量血球沉入孔底，大部分血球悬浮于

5、孔内）。2在对照孔合格的前提下，再观察待检血清各孔，以呈现“++”凝集的最大稀释倍数为该份血清的抗体效价。例如1号待检血清1-5孔呈现“++++～++”凝集，6-7孔呈现“++”凝集，第8孔呈现“+”凝集，第9孔无凝集，那么就可判定该份血清的口蹄疫抗体效价为1:128。接种O型口蹄疫疫苗的猪群免疫抗体效价达到1:128（即第7孔），牛群、羊群免疫抗体效价达到1:256（第8孔）呈现“++”凝集为免疫合格。一、检测试剂的性状、规格1、性状（1）液体血凝抗原：摇匀呈棕红色（或咖啡色），静置后，血球逐渐沉入瓶底。（2）阴性对照血清：淡黄色清亮稍带粘性的液体。（3）阳性对照血清：微红或淡

6、色稍混浊带粘性的液体。（4）稀释液：淡黄或无色透明液体，低温下放置，瓶底易析出少量结晶，在水浴中加温后即可全溶，不影响使用。2、包装（1）液体血凝抗原：摇匀后即可使用，5ml/每瓶，每瓶检测20-25头份血清。（2）阴性血清：0.5ml/每瓶，直接稀释使用。（3）阳性血清：0.5ml/每瓶，直接稀释使用。（4）稀释液：50ml/每瓶，直接使用，4-8℃保存。3、保存条件及保存期（1）液体血凝抗原：4-8℃保存（切勿冻结），保存期3个月（2）阴性对照血清：-15～-20℃保存，有效期1年。（3）阳性对照血清：-15～-20℃保存，有效期1年。（4）稀释液：4℃或-15℃保存，有效期

7、1年。二、注意事项1、为使您的检测获得正确结果，请您在检测前仔细阅读本说明书。2、严重溶血或严重污染的血清样品不易检测，以免发生非特异性反应。3、勿用900和1300血凝板，严禁使用一次性血凝板，以免误判结果。4、用过的血凝板应及时在水龙头下冲净血球。再用蒸馏水或去离子水冲洗2次，甩干水份，放37℃恒温箱内干燥备用。检测用具应煮沸消毒，37℃干燥备用。血凝板应定期浸泡在洗液中，也可浸泡在5%盐酸液内，48小时捞出后清水冲净。5、每次检测只做一份阴性、阳性和稀释液对照。“-”表示完