猪瘟_口蹄疫正向间接血凝试验应注意事项

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1、广西畜牧兽医2014年Vol．30(6)299殺櫌櫌櫌櫌櫌櫌櫌櫌櫌殺櫌櫌殺养猪与猪病防治櫌櫌櫌櫌櫌櫌櫌櫌櫌殺猪瘟、口蹄疫正向间接血凝试验应注意事项何桂松(大新县动物疫病预防控制中心，广西大新532300)中图分类号:S858．285．3文献标识码:B文章编号:1002－5235(2014)06－0299－02猪瘟、口蹄疫正向间接血凝试验是县级兽医实液器装吸嘴，不可反复用力撞击吸嘴，以免重要数验室动物疫病监测、检验免疫效果的主要手段之据发生飘移。②吸液:预先吸放液1次～2次浸润一。然而，作为一种微量的定量反应，受多种因素吸嘴内壁，再与液面垂直，吸头浸入液面3mm以影响，一些环节

2、操作不当都可能使最后的判定与实下，缓慢吸液。际值相差较大，甚至相反。为尽可能减少误判，提2．2恒温水浴锅高检测准确率，笔者在猪瘟、口蹄疫正向间接血凝为保证结果准确，要将待检血清置于恒温水浴试验实际操作中获得一些体会，现综合归纳如下。锅内56℃、30min水浴灭活，除去血清中影响检测结果的杂质。1实验室环境控制2．3反应板［1］1．1温度选用110°、96孔Ⅴ型血凝反应板。为避免正向间接血凝试验对温度敏感，室内环境温度混乱，用记号笔在反应板孔第一行(上左→右)和［1］需控制在20℃～25℃范围内。因为温度过高，第一列(左上→下)标记顺序符号，如“2、4、6、8”抗原与抗体充分结

3、合所用的时间会明显缩短，血凝等。检测需用多块反应板时，注意标记反应板的顺反应速度加快，不易掌握判定时间，且判定时易出序。错。温度过低，血凝反应速度减慢，往往未等到抗3操作及判定原与抗体充分结合，就判定结果，造成检测结果发生误差。因此，试验前，应先把空调温度调到3．1操作22℃，使室内温度控制在20℃～25℃范围内。3．1．1反应板布局。依据个人操作习惯，把阴性1．2湿度对照4个孔、稀释液对照4个孔及阳性对照12个正向间接血凝试验对湿度虽没有严格要求，但孔放于反应板前两排，也可放于后两排。笔者个人作为理化反应之一，应按理化实验室要求把相对湿操作，习惯放于后两排。检测的样品多，只

4、需稀释度控制在30%～70%之间。另据一些理化专家通待检血清后，在最后一块反应板做一份对照即可。过实验测量，证实人体感到最舒适的相对湿度在3．1．2加稀释液和抗原。用手按压移液器到第二45%～65%之间。对此，从人性化方面考虑，使实档吸液，加液按压到第一档。加抗原，吸嘴尖端不验操作人员有一个舒适的环境，也需把实验室相对可触碰到反应板孔内的液面。湿度控制在45%～65%范围内。3．1．3倍比稀释。用手按压移液器到第一档，吸嘴尖头沉入孔底再稍提起，倾斜移液器，使吸嘴轻2仪器设备使用靠于反应孔边缘固定。每孔至少反复吸放操作32．1移液器次，动作要轻缓、均匀。移液器要定期校正或校准，

5、确保使用时量取精3．1．4反应板置于微量振荡器上振荡10秒～15准。选用规格为100μL单道、50μL八道及200秒，混匀，盖上玻板，静置。μL八道移液器各一把，依次取50μL、25μL、50μL3．1．5试验结束，立即用酒精棉球擦拭反应板，除量程。使用时注意:①装吸嘴单道移液器:将移液去反应板上所有标记，三联水龙头下冲洗，除去板端垂直插入吸嘴，左右转动，上紧;八道移液器:移孔中红血球，甩干，对准光照，察看孔内是否残留有液端第一道对准第一个吸嘴，其它依次对准，适当红血球或污垢，若有，再用小毛刷伸入孔内擦拭除用力垂直插入吸嘴，以略超过O型环口即可。移去，若发现反应孔刮花严重，应

6、废弃不用。反应板300广西畜牧兽医2014年Vol．30(6)反复冲洗干净后，甩干，置于37℃温箱中烘干备集现象。说明该试验成立。③有些孔凝集现象不用。太明显，尤其关系到要么是阴性，要么是阳性判定3．2判定结果的关键第4、5孔，可把反应板举起，从背面观察判将一张白纸放在实验台上，放上反应板，白色定，结果会较准确。背景下观察。判定需注意:①判定时间需静置2h，正向间接血凝试验虽然操作简单，但是也需要即到即判。②观察阳性对照第1至12孔，从全凝试验者平时加强操作练习，多进行比对分析和交流集到无凝集，呈现阶梯式的凝集反应现象，阳性对总结，积累经验，方能熟练掌握试验操作技术，提高照血

7、凝效价8㏒2以上(即观察阳性对照第8孔血检测准确性。沉点大小是否小于或等于稀释液对照血沉点大小参考文献的一半);阴性对照4个孔和稀释液对照4个孔红［1］沈秋姑，邹勇．影响口蹄疫正向间接血凝试验因素的血球全部沉于孔底，形成大小一致的圆点，即无凝研究［J］．江西畜牧兽医杂志，1998，(6):12－13．一起猪圆环病毒与副猪嗜血杆菌混合感染的诊治报告甘一波，黄宇，张红云，钟传德，段振华(广西玉林市动物疫病预防控制中心，广西玉林537000)中图分类号:S858．285．2文献标识码:B文章编号:1002－5