荧光定量PCR检测慢性前列腺炎病原体及临床应用.doc

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1、荧光定量PCR检测慢性前列腺炎病原体及临床应用作者：邵剑春，孙宝明,胡大春单位：【关键词】荧光探针【摘要】目的应用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术准确检测久治不愈或复发性慢性前列腺液中病原体DNA含最，为临床诊断和治疗提供依据。方法应用荧光探针标记引物的荧光定SPCR对246份前列腺液标本进行淋球菌（NG）、沙眼衣原体（CT）、解腺支原体（UU）检测;其中3项检测结果均为阴性的82例患者，于清晨起床未小便吋从尿道口収标本重新检测病原体。结果246份前列腺液病原体阳性率,NG为15.45%,CT为17.48%,UU为22.76%。其中82份尿道口分泌物病原

2、休的阳性率，NG为9.76%,CT为28.05%,UU为23.17%。结论采用FQ-PCR检测慢性前列腺炎病原休，具有简便、快捷、特异性高、定量准确等优点,对其诊断和治疗有指导意义。对久治不愈或复发性患者，在淸晨起床未小便时从尿道口留取尿道分泌物标本，可提高病原体的检出阳性率。慢性前列腺炎是临床治疗非常棘手的男科疾病之一，杳找病因尤显重要。淋球菌（NG）、沙眼衣原体（CT）、解豚支原体（UU）是引起慢性前列腺炎的常见病I大I。而且NG、CT、UU引起的慢性前列腺炎在临床中一直呈上升趋势。目前许多医院仍在采用前列腺液镜检、培养、免疫学检测或常规PCR等方法进行前列

3、腺炎病原体检测。前列腺液常规镜检虽然简便但不能确诊是何种病原体的感染。培养虽然特并性高，但所需时间长，而且有的病原体如CT、UU的培养灵敏度较低。检测病原体抗原灵敏度低，约105〜107个病原体才能检测到[1]。常规PCR虽简便、快捷，但存在不能定量、易交叉污染等缺点。我院采用荧光定量PCR方法检测前列腺液病原体NG、CT、UU等，取得了较好的临床效果，现报告如下。1材料与方法1.1材料1.1.1标本来源标本來自2000年1月〜2003年9月到我院泌尿外科就诊的成人男性患者。多数患者病程较长，临床症状或重或轻，久治不愈。患者经前列腺液涂片曲规镜检，白细胞在（++

4、）以上，未检出细胞内外双球菌，前列腺液支原体、衣原体培养为阴性。共收集前列腺液标本246例，年龄20〜57岁。1.1.2仪器personalcyclerPCR扩增仪（Biometra）。DA620微量荧光检测器（中山医科大学达安基因公司）。1.1.3FQ-PCR试剂盒NG、CT、UU试剂盒均为中山医科大学达安基因诊断中心产品。1.2方法1.2.1标本収材方法前列腺按摩收集前列腺液于尢菌试管中;或清展起床未小便吋，用消毒棉签插入尿道口捻转并停留数秒后，収出棉签放入加有1ml生理盐水的无菌试管中。1.2.2标本处理采用常规碱裂解法提収DNA。1.2.3试剂盒使用方法

5、山中山医科大学达安基因诊断中心生产，按下列条件扩增:93°C2min预变性，然后按93°C45s及55°C120s,共做40个循环。1.2.4质量控制均按试剂盒内提供的定量阳性质控标准品做定量阳性质控，用双蒸水做阴性对照。并参加卫生部的室间质评，能力比对实验成绩合格。2结果2.1FQ-PCR检测246例询列腺液标本结杲见表1。表1FQ-PCR检测246例前列腺液标本结果（略）2.23项检测结果阴性者尿道II分泌物检测结果其中3项检测结果均为阴性但仍有明显临床症状的患者82例，另在淸晨起床未小便时从尿道II取分泌物检测结果，见农2。衣23项

6、检测结果阴性者尿道口分泌物检测结果（略）2.1NG、CT、UU检出阳性率分别为19.51%(48/246),28.46%<70/246),32.11%(79/246)。3讨论慢性前列腺炎的患者，采用前列腺液镜检、培养、免疫学检测或帘规PCR等方法进行前列腺炎病原体检测，山于其方法的局限性，阳性检出率较低［2］。本文结果提示,FQ-PCR检测其病原体可作为首选方法。FQ-PCR技术［3］弥补了當规PCR易产生假阳性和不能定量两大技术缺陷，它利用了基因扩增的敏感性、分子杂交的特异性和光化学的精确性，把PCR、分子杂交和光化学融为一体，使PCR扩增和产物分析的全过程均

7、在单管封闭条件下进行。其简便、快捷、特异性高、定量准确等优点为临床提供了一个更方便、更可靠的诊断技术。检测结果显示，3种病原体检出阳性率从高到低依次为UU&g(;CT>NG,与王千秋［4］等报道相接近，UU是3种病原体中引起慢性前列腺炎的首位病原休。NG的检出阳性率低于CT,可能与患者L1用多种抗生素有关。3种病原体的DNA含量偏低，与标本取材和患者长期多种药物治疗有关。山此，临床医生対慢性前列腺炎患者杳找病因时，可首选FQ-PCR检测UU、CT、NG病原体。从结果分析可看出，检测标本用尿道分泌物比前列腺炎液检出阳性率要高。所以对久治不愈或复发性的慢性前列

8、腺炎的患者，尽可能说服患