反相液相色谱中调整流动相组分比例对分离效果的影响.pdf

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1、2015年2月反相液相色谱中调整流动相组分比例对分离效果的影响39反相液相色谱中调整流动相组分比例对分离效果的影响黄强李华勇刘新国2(1．江西省吉安市质量技术监督检测中心，江西吉安343000；2．江西省产品质量监督检测院，江西南昌33000)摘要：用国标法同时测定苯甲酸、山梨酸和糖精钠，通过改变流动相组分比例，即改变流动相极性，对三种比例所得出的分离效果进行比较，考察了三种组分的保留时间、分离度及拖尾因子等参数变化。试验结果表明：(1)增加甲薛比例，三种待测组分保留时间都提前，且糖精钠的变化最大；(2)增加甲醇比例可以使三种组分的分离度和拖尾因子都变小，同时也可以满足对分离度的要

2、求；(3)综合分析试验所得各参数，得出色谱系统所需最适流动相配比，实现较好的分离效果，试验的精密度也满足要求。关键词：液相色谱流动相分离度系统适用性试验反相色谱法是以表面非极性载体为固定相，以比色谱柱为Cl8柱，4．6mm×250mm，5m；柱温为固定相极性强的溶剂为流动相的一种色谱分离模式，3OqC；检测器为紫外检测器，检测波长为230nm；流动是基于样品中的不同组分和固定相之间作用的不同而相为甲醇与O．02mol／L乙酸铵的混合溶液；流速为1．0将各组分分离，具有柱效高、分离能力强、保留机理清ml／mln；进样量为l0L。楚等特点，是液相色谱分离模式中使用最为广泛的一1．3试验

3、方法种。反相色谱系统中的固定相一般采用硅胶表面键合本文试验采用GB／T23495—2009中对苯甲酸、山疏水基团，流动相首选甲醇一水系统，在一些大分子物梨酸、糖精钠的测定方法，甲醇与0．02mol／L乙酸铵溶质的分离中，多采用离子强度较低的酸性水溶液，添加液分别过O．45m微孔滤膜，通过改变甲醇与乙酸铵一定量的乙腌或甲醇等与水互溶的有机溶剂作流动溶液的体积比来调节流动相的极性，采用甲醇与O．O2相。mol／L乙酸铵溶液体积比分别为：5：95、10：90和15：85色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离三种比例来进行，将苯甲酸、山梨酸、糖精钠混合标准度、重复性和拖尾因子等四个参数

4、。其中，分离度和拖溶液进样10。在仪器工作条件下进行测定，比较不尾因子是考察分离效果的重要指标。实际检测中，各同比例下混合标准溶液中三种组分的保留时间、分离品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测度及拖尾因子等参数的变化。器类型不得改变外，其余如色谱柱内径、长度、载体粒2、结果与讨论度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样2．1流动相比例的选择量、检测器的灵敏度等。均可适当改变，以适应供试品调整流动相组分比例时，一方面以组分比例较低并达到系统适用性试验的要求。者(小于或等于50％)相对于自身的改变量不超过笔者根据自己多年该方面工作的实际经验出发，±30％且相对于总

5、量的该变量不超过±10％为限，如以国标法测定苯甲酸、山梨酸和糖精钠为试验方法。30％相对改变量的数值超过总量的10％时，则改变量在色谱系统的适用性试验时，通过改变甲醇在流动相以总量的±10％为限；另一方面，对于十八烷基硅烷键中的比例，实现了待测组分较好的分离效果。合硅胶为固定相的反相色谱系统，流动相中有机溶剂1、材料与方法的比例通常应不低于5％。故本文采用5：95、10：90和1．1仪器与试剂15：85三种比例来进行。岛津LC一2010A型高效液相色谱仪，配紫外检测2．2三种组分保留时间的变化器，色谱工作站。保留时间是待测组分从进样到出现峰最大值所需苯甲酸、山梨酸、糖精钠混合标准溶

6、液：浓度均为的时间。理论上来说，保留时间越长越有利于组分分0．100mg／mL。离，但时间越长，待测组分在柱子里扩散越严重，越容乙酸铵为分析纯，甲醇为色谱纯，试验用水为超纯易影响分析结果，而且人力及试剂损耗等成本也越高。才c。通过比较三张色谱图1、2、3及表l、2、3可知：甲醇1．2仪器工作条件在流动相比例的较小变化都会使苯甲酸、山梨酸、糖精江西化工2015年第i期钠的保留时间发生明显的改变。增加甲醇在流动相中裹3色谱田3分析结果的比例，可以使得苯甲酸、山梨酸、糖精钠的保留时间提前；糖精钠的保留时间变化更大，由原来的最后出峰变为最先出峰。uv1000002．3三种组分之间的分离度分

7、离度的大小表示待测组分与相邻共存物之间的分离程度，可以通过测定待测组分之间的分离度来对色谱系统进行评价与控制。分离度是两个相邻组分的0保留值之差与其平均峰宽值之比。用R表示，当R>0i020min0．8时，两组分不能完全分离；当O．8