固定化脲酶的制备及酶学性质研究.pdf

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1、第22卷第6期化学研究与应用Vo1．22，No．62010年6月ChemicalResearchandApplicationJun．，2010文章编号：1004—1656(2010)06-0735-04固定化脲酶的制备及酶学性质研究汪燕玲，崔琳，柳畅先(中南民族大学化学与材料科学学院，分析化学国家民委重点实验室，湖北武汉430074)关键词：壳聚糖；脲酶；固定化；酶学性质中图分类号：0652文献标识码：AStudyonpreparationandenzymaticcharacterizationsofimmobilizedureaseWANGYan—lin，CUILin，LIUChan

2、g—xian‘(KeyLaboratoryforAnMyticalChemistryoftheStateEthnicAfairsCommission，CollegeofChemistryandMaterialScience，South—CentralUniversityforNationalities，Wuhan430074，China)Abstract：Ureasewasimmobilizedonchitosanwithglutaraldehydeasthecrosslinkingreagent．Theoptimumconditionsofimmobilizationfortheen

3、zymewerethatchitosanwascrosslinkedwith6％glutaraldehydeintheenzymesolutionofpH7．0andreactedwithureasefor1．5h．ThestudyontheenzymaticcharacterizationsoffreeandimmobilizedureaseindicatedthatoptimumpHvalueoftheenzymaticreactionwas7．0，theoptimumtemperatureswere28℃and68℃respectively．The。valueforureawer

4、e16mmol／Land5mmoVLrespectively．Keepingthefreeandimmobilizedureaseat25℃for120min．theactivityremained35％and72％respectively．Itindicatedthattheimmobilizedenzymehadbetterthermalstability．Keywords：chitosan；urease；immobilization；enzymaticcharacterizations固定化酶是束缚在一定空间内仍能进行其特有反应的生物催化剂，近年来对于固定化酶的研1实验部分究非常

5、活跃¨。目前酶的固定化方法主要有吸附法，交联法，包埋法以及化学共价法，这些方法1．1仪器与试剂各有特点，应用领域多为食品工业、制药、医学SHA—C水浴恒温振荡器(江苏医疗仪器厂)，治疗等方面。固定化酶因其具有能回收重复利721-2A型分光光度计(湖南益阳市仪表厂)，PHS一用、稳定性好等特殊的优点，在各领域有广泛的应3C型精密pH计(上海雷磁仪器厂)，FA．2004型用前景，但固定化酶在分析测定方面的应用较少。电子分析天平(上海精科天平)，CS-501型超级恒基于此，本研究提出了从酶法测定的角度研究固温水浴槽(武汉实验仪器厂)，DF．101S型集热式定化酶的制备及应用，以生物相容性很好

6、的壳聚恒温加热磁力搅拌器(河南省予华仪器有限公糖作为载体(壳聚糖是甲壳素的脱乙酰基产物，分司)，SHZ—D(III)型循环真空泵(上海东玺制冷仪子链中存在大量的氨基和羟基，可通过改性及交器设备有限公司)，XYJ81．1电动离心机(金坛市联，使其具有更多的功能)引，用微米级的交联壳恒丰仪器厂)。聚糖微球对脲酶固定化，并进行酶催化动力学性壳聚糖(脱乙酰度80％，武汉天源生物技术有质研究，找出将其用于酶法测定的条件。限公司)，戊二醛(25％水溶液，天津市科密欧化学收稿日期：2009-09．18：修回日期：2010-01-04基金项目：中南民族大学自然科学基金(XTZ09005)资助项目联系人

7、简介：柳畅先(1956一)，女，教授。主要研究方向：生化分析。Email：ehangxianliu@singeom736化学研究与应用第22卷试剂开发中心，分析纯)，冰乙酸(武汉联碱厂，分pH值的磷酸缓冲液中制备壳聚糖载体。结果表析纯)，纳氏试剂，脲酶(Sigma公司)。明pH7．0时所得的固定化酶活力最高，见图2。1．2实验方法溶液pH值的改变会影响载体表面带电基团的电1．2．1壳聚糖载体的制备取壳聚糖0．6g，用性以及脲酶所带电荷，从而影响