聚丙烯酰胺凝胶低毒性替代材料研究.pdf

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1、化工设计通讯新材料与新技术第42卷第3期ChemicalEngineeringDesignCommunicationsNewMaterialandNewTechnology2016年3月聚丙烯酰胺凝胶低毒性替代材料研究122222王国瑀，杨美娟，王俊秀，王磊，杨志伟，喻长远（北京化工大学生命科学与技术学院，北京100029）摘要：聚丙烯酰胺凝胶电泳广泛用于分子生物学实验。但是丙烯酰胺具有潜在神经毒性。我们采用N，N-二甲基丙烯酰胺（DMA）和N-（2-羟乙基）丙烯酰胺（HEA）两种单体材料代替丙烯酰胺制备蛋白质凝胶。通过测定聚合反应体系的温度变化，优化了体系中催化剂TEMED的加入

2、量；通过实际的电泳实验确定了单体与交联剂与N，N-甲叉双丙烯酰胺的配比，使其得到孔径大小适宜的凝胶，并对这两种凝胶的性能做出初步的评价。最后，将优化好条件的凝胶应用于WesternBlot技术分析检测BSA蛋白，蛋白条带明亮清晰。关键词：聚丙烯酰胺凝胶；低毒；材料中图分类号：TE39文献标志码：B文章编号：1003–6490（2016）03–0055–03StudyonLowToxicSubstituteMaterialsofPolyacrylamideGelWangGuo-yu，YangMei-juan，WangJun-xiu，WangLei，YangZhi-wei，YuChan

3、g-yuanAbstract：Polyacrylamidegelelectrophoresisiswidelyusedinmolecularbiologyexperiments.Butacrylamidehaspotentialneurotoxicity.Weusedn，N-dimethylacrylamide（DMA）andN-（2-hydroxyethyl）acrylamide（HEA）twomonomermaterialinsteadofacrylamidebyproteingel.Throughthedeterminationofpolymerizationtemperat

4、urechangesinthereactionsystem，optimizationoftheaddedamountofcatalystTEMEDsystem；throughtheactualelectrophoresisexperimentstodeterminethemonomerandcrosslinkingagentwithN，N-methylenebisacrylamideratiooftheproperporesizeofthegel，andmakepreliminaryevaluationoftheperformanceofthetwogels.Finally，the

5、optimizationofthegoodconditionsofthegelisappliedtoBlotWesterntechnicalanalysisanddetectionofBSAprotein，proteinbandsbrightandclear.Keywords：polyacrylamidegel；lowtoxicity；material聚丙烯酰胺凝胶电泳以其低廉的分析成本、简单的操作、细胞内的谷胱甘肽快速出现耗竭，这是肝细胞发生氧化应激良好的重复性、较短的分析时间等优势，广泛应用于生物、的重要标志；在细胞结构方面，丙烯酰胺会导致肝细胞线粒医学、食品、农学等诸多学科领

6、域蛋白质以及多肽类化合物体和溶酶体的破坏，线粒体的膜电位下降；另外丙烯酰胺还的分离鉴定。其分离机制是在电场的作用下，蛋白质在聚丙可激活caspase-3这一诱导细胞凋亡的最终中介，导致肝细胞烯酰胺凝胶所形成的网状结构中发生迁移，其迁移的距离与死亡。丙烯酰胺在常温下为白色粉末化合物，可经消化道和电泳条件以及蛋白质分子的分子量大小、形状及电荷量有关。呼吸道进入人体，在丙烯酰胺溶液和凝胶的制备过程中对实而SDS-PAGE是在电泳缓冲液和蛋白样品液中分别加入了离验员的健康造成威胁，因此，寻找一列丙烯酰胺的替代品显子去污剂（SDS）和强还原剂（β-巯基乙醇），使得蛋白质的得极为必要。我们在试

7、验中尝试了两种低毒的酰胺类化合物迁移距离主要取决于蛋白质分子量的大小而忽略了蛋白质自作为单体代替丙烯酰胺发生聚合反应，调整了体系中聚合反身所带电荷带来的影响。应增速剂TEMED的加入性以及单体与交联剂的配比，使之在然而，丙烯酰胺潜在的毒性限制了它在生物凝胶领域使室温条件下形成性质稳定、质量可控的凝胶。用。丙烯酰胺属中等毒性化合物，丙烯酰胺可以损害中枢神1实验部分经系统和周围神经系统。长时间暴露于丙烯酰胺的职业工人1.1主要原料或者是实验的动物，会出现共济失调、骨骼肌肉