微生物限度方法适应性试验方案汇总.doc

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1、XXXXXXXXXXX有限公司胶囊用明胶微生物限度检查方法适用性试验方案文件编号：YZF-QC-001-01起草人：（QC）年月日审核人：（QA）年月日批准人：（质量负责人）年月日目录１.验证目的２.验证原理３.验证人员４.相关文件５.验证内容６.验证周期7.验证综合结论　1.验证目的建立微生物限度检查方法适用性试验验证，通过验证确认检测所采用的方法适合于本公司所用原料胶囊用明胶的微生物限度的测定。2.验证原理通过试验数据结果，比较实验组中试验菌的恢复生长结果来评价整个验证方法的准确性、有效性和重现性。3.验证人员职位姓名负责内容QC检验员负

2、责验证方案的起草和实施，并对所测数据准确性负责。QC负责人负责验证方案的审核及按照规定的取样计划对标准检验操作程序的准确执行，负责组织实施。QA负责人负责验证实施过程中的监督检查，取样，确保结果的可靠性。审核人负责验证方案及报告的审核和批准。4.相关文件《中国药典》2015版四部《通则1105、通则1106》5.验证内容通过验证以确认所采用的方法适合于该产品需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定；确认所采用的方法适合于该产品控制菌的检查。根据样品特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。若符合，就按验证的

3、方法和条件进行药品的微生物限度检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。5.1微生物计数法验证当建立产品的微生物限度检查时，应进行需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定。验证试验可与供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数同时进行。5.1.1验证用菌种枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501（第一代）金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003（第一代）铜绿假单胞菌CMCC（B）44102（第一代）白色念珠菌CMCC（F）98001（第

4、一代）黑曲霉CMCC（F）98003（第一代）5.1.2验证依据：中国药典2015版四部5.1.3验证步骤5.1.3.1菌液制备5.1.3.1.1分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，经30~35℃培养18~24小时后，分别取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的肉汤培养物0.9%无菌氯化钠溶液1ml+9ml0.9%无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-6~10-7，细菌数为不大于100cuf/ml，做活菌计数备用。5.1.3.1.2接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基中，经20~

5、25℃培养2到3天后，取1~2环白色念珠菌斜面培养物加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-4~10-7，菌液为不大于100cfu/ml，做活菌计数备用。5.1.3.1.3接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基中，经20~25℃培养5~7天后，取黑曲霉斜面培养物，加3~5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液将孢子洗脱，吸出孢子悬液1ml+9ml0.9%无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-4，菌液为不大于100cuf/ml，做活菌计数备用。5.1.3.2阴性对照为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性

6、对照试验。5.1.3.3计数方法适用性试验5.1.3.3.1供试液制备取供试品10g，加45℃PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，振摇，放置45℃水浴保温使其完全溶解，摇匀，作为1:10供试液，备用。5.1.3.3.2试验组：取1:10的供试液加入试验菌，使1ml供试液中含菌量不大于100cfu。注入平皿中，立即倾注琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。5.1.3.3.3菌液组：取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液同试验组操作。测定所加的试验菌数。5.1.3.3.4供试品对照组：取制备好的供试液。以稀释

7、液替代菌液同试验组操作。按菌落计数方法测定供试品本底菌数。5.1.3.3.4阴性对照组：取0.9%无菌氯化钠溶液，空白对照。5.1.4结果至少应进行3次独立试验。若试验组的菌回收率均0.5～2，则照该供试液制备方法和计数法测定供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数；若任一次试验中试验组的菌回收率不在范围内，应采用自然沉降法、培养基稀释法、离心沉淀集菌法、薄膜过滤法、中和法等方法或联合使用这些方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法验证，使试验组菌回收率在规定范围内。5.1.4.1试验组的菌回收率=[(试验组平均菌落数-供试品对照组平均菌落数)/

8、菌数组平均菌落数]5.1.4.2连续3批验证的菌落计数结果5.1.4.2.1规格：0#蓝白批号：验证试验结果（常规法）单位（cuf/ml）技术方法试验菌株菌浓度（m