2016上海交通大学遗传学实验PPT实验七细菌转导.ppt

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1、实验顺序：先做后讲，因为中间需要等待2小时分组方案：2人制备λ噬菌体裂解液2人涂受体菌平板和点加λ噬菌体实验七、细菌的局限性转导五、实验步骤（一）噬菌体裂解液的制备（制备λdgal＋）5ml供体菌3000rpm10min（多组）吸去上清4mlPB重悬防止污染！重悬液取2ml打开盖，UV15S加2ml2LB轻摇混匀盖上盖，37℃避光（抑制光修复）1-N：张三李四王五赵六1.按右图在EMB平板上做好标记2.用受体菌涂出两条菌带（1-2环菌/条）3.37℃倒置培养1.5小时（二）转导（点滴法）的步骤实验七、细菌的局限性转导一、实验目的（一）了解转导

2、的基本原理（二）掌握转导实验的基本方法（三）验证细菌遗传物质可以通过噬菌体转移二、实验原理(一）转导的概念：转导是以噬菌体为媒介所进行的细菌遗传物质的重组过程。在这一过程中，细菌的一段染色体被错误地包装在噬菌体的蛋白质外壳内，并通过感染而转移到到另一个受体细菌内JoshuaLederberg(1925-2008)1958年获诺贝尔奖（二）转导的发现由Lederberg和Zinder于1952年发现鼠伤寒沙门氏菌（Salmonellatyphimurium）的两种营养缺陷型LA2:phe+trp+tyr+his-LA22:phe-trp-tyr

3、-his+基本培养基基本培养基单独培养基本培养基LA22+LA2混合培养LA2:phe+trp+tyr+his-LA22:phe-trp-tyr-his+LA22LA2FA?U形管培养LA2:phe+trp+tyr+his-LA22:phe-trp-tyr-his+吹/吸LA22菌株上清液基本培养基+RNA酶+LA2菌株+DNA酶+LA2菌株基本培养基噬菌体介导的遗传物质转移转导菌落裂解？P22发生机理“Weweren'tlookingfortransduction--webumpedintoit”.(三）转导的类型P22噬菌体λ噬菌体1.普

4、遍性转导可以转导细菌染色体组的任何部分，例如P22噬菌体介导的转导2.局限性转导只能转导细菌染色体组的特定部分，例如λ噬菌体介导的转导ABBBA转导噬菌体普遍性转导可以转导细菌染色体组的任何部分（例如：P22噬菌体）A基因组的任何部分都可能通过转导噬菌体进入B基因组细菌染色体λ(dgal+)λ(dbio+)λ原噬菌体局限性转导只能转导细菌染色体组的特定部分（例如:λ噬菌体只能插到宿主基因组的gal和bio之间，所以只能转移gal或bio基因）噬菌体由外壳蛋白和DNA组成基因组DNA全长48.5kb至少有61个基因头部的包装上限为51kb（四）

5、本实验的原理5’GGGCGGCGACCTCCCGCCGCTGGA5’3’3’coscoscos环化λ噬菌体DNA的环化ADCBλ噬菌体DNA插入大肠杆菌基因组ADCB溶源性细菌原噬菌体细菌基因组DNAgal+插入宿主菌基因组的原噬菌体随宿主菌的分裂而增殖，当受到紫外线照射或温度改变时可以造成阻遏物失活，使裂解相关基因表达，噬菌体DNA环出、复制、转录、翻译、包装，细菌裂解，释放出数百个新噬菌体环出、复制、转录、翻译、包装裂解释放子代噬菌体在环出、复制、包装过程中偶尔会发生错误而产生转导噬菌体（频率≈10-6)转导噬菌体能感染宿主菌，但由于DN

6、A缺失，不能独立完成复制、包装等过程，所以是缺陷噬菌体溶菌控制晚期控制DNA合成控制阻遏早期控制重组删除与整合尾部合成头部合成λ噬菌体基因组DNA各部分的功能λ(dgal+)E.coliK12Sgal－E.coliK12Sgal－受体菌受体菌λ半乳糖EMB培养基通过转导噬菌体获得gal+基因的受体菌称为转导子转导子因能利用半乳糖而产生大量的酸，在EMB培养基上显示为紫色,并带有金属光泽gal+转导子gal-非转导子非转导子因不能利用半乳糖而不产生大量酸，在EMB培养基上显示为白色E.coliK12(λ)gal+是一种双重溶源菌λ(dgal+)

7、λ裂解液中(dgal+)(转导噬菌体)占50%(正常噬菌体)占50%宿主菌染色体本实验所用的供体菌三、实验材料供体菌：E.coliK12(λ)gal+受体菌：E.coliK12Sgal-四、实验器具和药品1.器具：培养皿，试管，离心管，接种棒，移液器2.培养基：LB液体培养基，2×LB液体培养基，半乳糖EMB培养基。（配制方法见《遗传学实验指导》）3、试剂：磷酸缓冲液（PB）、氯仿五、实验步骤（一）噬菌体裂解液的制备（制备λdgal＋）37℃过夜取1ml100mlLB5ml供体菌37℃3hr3000rpm10min（多组）E.coliK12

8、(λ)gal+吸去上清4mlPB重悬防止污染！3000rpm10min（多组）噬菌体裂解液细胞碎片重悬液取2ml噬菌体裂解液取1ml打开盖，UV15S（诱发SOS反