临床医学毕业论文早期巨噬细胞激活和核因子-κb活性在深低温停循环肺损伤中的作用.doc

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1、XX大学毕业论文巨噬细胞激活和核因刊lb活中的作用姓名：2014年6月25日早期巨噬细胞激活和核因子・kB活性在深低温停循环肺损伤中的作用作者：高波涛，郑景浩，徐志伟，刘锦芬，苏肇伉，丁文祥【摘要】FI的探讨早期巨噬细胞的激活和核因子kappaB(NF-kB)活性在深低温停循环(DHCA)肺损伤屮的作用及其可能的作用机制。方法通过DHCA幼猪模型的建立，采用免疫组化和ELISA方法，检测缺血一再灌注不同吋段肺组织巨噬细胞的激活.NF-kB的表达以及炎性因子含量的变化来检验巨噬细胞激活和NF・kB活性在DHCA肺损伤屮的作用。结果NF

2、-kB表达和炎性因子含量的变化与DHCA缺血■再灌注呈吋间依赖性，且在DHCA缺血■再灌注1.5h^NF・KB的表达达到高峰，此时肺组织的炎性细胞以巨噬细胞为主。结论早期巨噬细胞的激活和NF・kB活性可能加重DHCA肺损伤的发生。【关键词】核因子kappaB;深低温停循环;再灌注损伤Abstract:OBJECTIVEToexploretheroleofearlyactivityofmacrophagesandnuclearfactor-kappaB(NF-kB)indeephypothermiaandcirculatoryarre

3、st(DHCA)andalsoevaluatestheirpossibleeffectivemechanism.METHODSTwelvepiggieswererandomlydividedintotwogroups.Thereweresixpiggiesineachgroup,normaltemperaturecardiopulmonarybypass(CPB)andDHCA.Lungtissueandvenousbloodsampleswerecollectedfromeverypigtomcassurctheviranccso

4、fNF-kBbyimmunohistochemistryandinflammatorysfactorbyELISAatthesixscheduleddifferenttime.RESULTSTheexpressionofNF・kBandchangesofinflammatoryfactorhascorrelationwithtimeofischemiareperfusionandreachedtheirpeakat25hoursafterischemiareperfusion.Macrophageswerethemostabunda

5、ntcellsinpulmonaryinflammatorycells.CONCLUSIONTheearlyactivityofmacrophageandNF-kBmayplayanimportantroleinlunginjuryofDHCA・Keywords：Nuclearfactor-kappaB;Deephypothermiaandcirculatoryarrest;Reperfusioninjury深低温停循环(deephypothermiaandcirculatoryarrest,DHCA)是新生儿和婴幼儿复杂先天性心脏

6、病手术屮常用的一种体外循环(cardiopulmonarybypass,CPB)技术，急性帅损伤是这些患者术后的重要并发症和死亡原因之一，然而其发生机制尚不十分清楚。我们通过建立DHCA模型，来探讨早期巨噬细胞的激活和核因子kappaB(NF-kB)活性在DHCA肺损伤■

7、＞的作用及其可能的作用机制。1材料与方法1.1实验模型的建立健康幼猪12只,雌雄不限，体重(10.2±1.6)kg,2周龄，随机分为两组：对照组(常温并行循环组，n=6)和实验组(停循环组，n=6)o均常规行右房以及升主动脉插管，建立CPBo对照组并行循环180m

8、in;实验组并行循环30min后将体温降至22°C,然后停循环1h,Z后再灌注1.5h。1.2标本采集两组分别于并行循环前(T0)、并行循环30min(Tl)＞90min(停循环1h,T2)、120min(再灌注0.5h,T3)、150min(再灌注1h,T4)、180min(再灌注1.5h,T5)6个吋间点留取肺组织标本，用4%甲醛尚定，以备做免疫组化定性测量NF-KB(LabVision公司，美国)，同时抽取静脉血标本以备用。参照试剂盒(Sigma公司，美国)操作说明采用EL1SA法测定肿瘤坏死因子-a(TNF-a)＞白介素(I

9、L)・8和IL・6含量。1.2实验方法采用免疫组织化学法检测NF・kB(P65)的表达。取用4%甲醛固定新鲜肺组织标本，石蜡包埋标准切片后，二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水;3%过氧化氢阻断内源性过氧化酶;0.01molTris-EDTA微波