早期巨噬细胞激活和核因子

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1、早期巨噬细胞激活和核因子：高波涛，郑景浩，徐志伟，刘锦芬，苏肇伉，丁文祥【摘要】目的探讨早期巨噬细胞的激活和核因子kappaB(NF-κB)活性在深低温停循环(DHCA)肺损伤中的作用及其可能的作用机制。方法通过DHCA幼猪模型的建立，采用免疫组化和ELISA方法，检测缺血—再灌注不同时段肺组织巨噬细胞的激活、NF-κB的表达以及炎性因子含量的变化来检验巨噬细胞激活和NF-κB活性在DHCA肺损伤中的作用。结果NF-κB表达和炎性因子含量的变化与DHCA缺血-再灌注呈时间依赖性，且在DHCA缺血-再灌注1.5h时NF-κB的表达达到高峰，此时肺组织的炎性

2、细胞以巨噬细胞为主。结论早期巨噬细胞的激活和NF-κB活性可能加重DHCA肺损伤的发生。【关键词】核因子kappaB;深低温停循环;再灌注损伤　　Abstract:OBJECTIVEToexploretheroleofearlyactivityofmacrophagesandnuclearfactor-kappaB(NF-κB)indeephypothermiaandcirculatoryarrest(DHCA)andalsoevaluatestheirpossibleeffectivemechanism.METHODSTlydividedintotal

3、temperaturecardiopulmonarybypass(CPB)andDHCA.LungtissueandvenousbloodsampleseverypigtomeassurethevirancesofNF-κBbyimmunohistochemistryandinflammatorysfactorbyELISAatthesixscheduleddifferenttime.RESULTSTheexpressionofNF-κBandchangesofinflammatoryfactorhascorrelationeofischemiarepe

4、rfusionandreachedtheirpeakat25hoursafterischemiareperfusion.Macrophagesostabundantcellsinpulmonaryinflammatorycells.CONCLUSIONTheearlyactivityofmacrophageandNF-κBmayplayanimportantroleinlunginjuryofDHCA.　　Keyiaandcirculatoryarrest;Reperfusioninjury　　深低温停循环(deephypothermiaandcircu

5、latoryarrest，DHCA)是新生儿和婴幼儿复杂先天性心脏病手术中常用的一种体外循环(cardiopulmonarybypass,CPB)技术，急性肺损伤是这些患者术后的重要并发症和死亡原因之一，然而其发生机制尚不十分清楚。我们通过建立DHCA模型，来探讨早期巨噬细胞的激活和核因子kappaB(NF-κB)活性在DHCA肺损伤中的作用及其可能的作用机制。　　1材料与方法　　1.1实验模型的建立健康幼猪12只，雌雄不限，体重(10.2±1.6)kg，2周龄，随机分为两组：对照组(常温并行循环组，n=6)和实验组(停循环组，n=6)。均常规行右房以及

6、升主动脉插管，建立CPB。对照组并行循环180min;实验组并行循环30min后将体温降至22℃，然后停循环1h，之后再灌注1.5h。　　1.2标本采集两组分别于并行循环前(T0)、并行循环30min(T1)、90min(停循环1h,T2)、120min(再灌注0.5h，T3)、150min(再灌注1h，T4)、180min(再灌注1.5h，T5)6个时间点留取肺组织标本，用4%甲醛固定，以备做免疫组化定性测量NF-κB(LabVision公司，美国)，同时抽取静脉血标本以备用。参照试剂盒(Sigma公司，美国)操作说明采用ELISA法测定肿瘤坏死因子-

7、α(TNF-α)、白介素(IL)-8和IL-6含量。　　1.2实验方法采用免疫组织化学法检测NF-κB(P65)的表达。取用4%甲醛固定新鲜肺组织标本，石蜡包埋标准切片后，二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水;3%过氧化氢阻断内源性过氧化酶;0.01molTris-EDTA微波修复;非免疫性动物血清封闭非特异性抗原;NF-κB(P65)一抗(1∶100稀释)，4℃孵育过夜，磷酸盐缓冲液(PBS)洗3次，每次5min;之后加辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗，37℃孵育30min，PBS洗3次，每次5min;3,3'-二氨基联苯胺(DAB)显色，苏木精复染，盐酸酒精分

8、化，梯度酒精脱水，二甲苯透明，封片，观察结果。每张切片在高倍镜下选择5个视野，记