实验十 细菌的凝集反应.ppt

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1、实验十细菌的凝集反应何伟06－04实验目的了解血清学方法的原理血清学方法在微生物诊断中的作用学会利用血清稀释法测定免疫血清的效价。实验原理颗粒性抗原(如细菌或红血球)的悬液与含有特异性抗体的血清混合，在适量电解质存在的情况下，经过一定时间，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。参加反应的抗原称凝集原，其血清中的抗体，称为凝集素。凝集反应的机制是由于抗原与其相应抗体间存在着相对应的极性基。极性基的相互吸附，使抗原外周的水化膜除去，由亲水溶胶变成憎水溶胶。由于电解质具有降低电位的作用，使抗原颗粒间的排斥力消除，从而产生了凝集现象。进行细菌的抗原分析、鉴定及分型，也可应

2、用已知细菌检查未知血清的抗体。有些细菌即使用生化反应很难区别，但其细菌抗原成份（包括菌体抗原、鞭毛抗原）却不同。利用已知的特异抗体测定有无相应的细菌抗原可以确定菌种或菌型。常用的方法为玻片凝集反应，用已知的特异免疫血清与待鉴定的细菌在玻片上做凝集反应，如出现凝集菌团则为阳性，说明该菌有相应的特异抗原。检测抗原的另一优点为在应用了抗生素治疗后，细菌生长被抑制，利用培养方法不能检出的细菌，因尚有抗原存在，在短期内仍可被检出，从而有助于明确病因。个别情况下还可利用噬菌体对细菌抗原型别分析，用于流行病学追踪调查。实验材料大肠杆菌斜面培养物，大肠杆菌悬液(含10×109个

3、／ml大肠杆菌的生理盐水悬液，并经60℃加热lh灭活)。大肠杆菌免疫抗血清。生理盐水、载片、小试管、试管架、移液管（1m1刻度、5ml）、水浴锅实验步骤玻片凝集反应(1)取洁净干燥的载片一片，用笔划分两区，一端注明为试验，一端注明为对照。(2)用接种环取生理盐水，置二滴于对照中心；同法滴大肠杆菌免疫血清于试验中心。(3)用接种环取少量大肠杆菌培养物分别研磨乳化于盐水及血清内，并均匀混合。(4)将玻片赂为反复摆动后静置于50℃恒温水浴表面上保温5～10min。(5)观察是否有凝集块出现，如有则记为阳性，没有则记为阴性试管凝集反应此法为免疫血清定量测定效价法

4、。(1)取清洁干燥的小试管10支，排列在试管架上。(2)用移液管加入生理盐水0.5m1于各试管中。(3)取免疫血清0.5m1加入另一试管，并加4.5ml生理盐水混合，制成稀释1:10的免疫血清。(4)用移报管吸取斜面培养18h的大肠杆菌培养物、稀释1：10的免疫血清0.5m1，注入第一管，并吸吹三次混匀；然后由依次吸取0.5m1注入第二管、第二管到第三管……如此类推到第九管为止。从第九管吸出o．5m1弃去，第十管不加血清，以作对照。(5)在每管中加入0.5m1经处理的大肠杆菌菌悬液，作为抗原。摇匀，并置45℃水浴中2h后，初步观察结果，转置冰箱，次日再观察

5、结果。观察结果时勿摇动试管。实验结果观察管底是否有凝集现象。记录结果①完全凝集，凝集块完全沉于管底，液体澄清，以“十十十十”记录。②凝集块沉于管底，液体稍混，以“十十十”记录。③部分凝集，液体混浊，以“十十”记录。④极少凝集．液体混浊．以“十”记录。⑤无变化记以“一”*取“十十”的稀释度作为免疫血清的效价问题与讨论(一)凝集反应为何要在适量电解质存在的情况下才能进行?(二)生理盐水中的电解质在凝集反应中有什么作用?(三)试管凝集反应与玻片凝集反应各有什么优点?