病毒感染的检查方法与防治原则-(2).ppt

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1、目的与要求了解病毒的诊断，抗病毒治疗，病毒感染的预防。第一节病毒感染的检查方法病毒感染的检查检测内容查病毒查特异性抗体病毒颗粒病毒抗原病毒核酸病毒酶类：如逆转录酶电镜直接观察光镜检查包涵体分离培养一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似，但应注意：1.标本用“双抗”或两性霉素B处理2.低温保存，尽快送检3.血清学诊断采双份血清二、病毒的分离与鉴定（一）病毒的分离培养细胞培养（cellculture）鸡胚接种（egginoculation）动物接种（animalinoculation）1.鸡胚培养采用孵化9～14天的鸡胚绒毛尿囊膜痘苗病毒、人类疱疹病毒尿囊腔接种部位流感病毒、腮腺炎病毒羊

2、膜腔流感病毒的初次分离卵黄囊嗜神经病毒1、鸡胚培养优点：易管理，不带微生物，成本较低缺点：操作程序复杂2.动物接种应用：尚无敏感细胞的病毒培养动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等优点：结果易观察，可建立动物模型缺点：有饲养条件要求，费用高，动物体内常带有潜伏病毒病毒的分离培养3.细胞培养单层细胞培养（monolayercellculture）分类悬浮细胞培养（suspendedcellculture）原代细胞（primarycell）细胞种类二倍体细胞（diploidcell）传代细胞系（continuouscellline）病毒的细胞培养细胞培养瓶单层细胞1．病毒增殖鉴定(1)细胞病变效应

3、（cytopathiceffect,CPE）①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）；②形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；③在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。（二）病毒的鉴定①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落麻疹病毒感染细胞呼吸道合胞病毒感染细胞②形成多核巨细胞或称融合细胞(1)细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)③形成包涵体(inclusionbody)(1)细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)腮腺炎病毒感染细胞(2)红细胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素(HA)

4、＋红细胞表面HA受体(3)干扰现象（interference）风疹病毒＋人胚肾细胞病毒增殖，CPE(－)埃可病毒＋人胚肾细胞病毒增殖，CPE(＋)＋人胚肾细胞风疹病毒？埃可病毒CPE(-)—风疹病毒(+)埃可病毒(-)CPE(+)—风疹病毒(-)埃可病毒(+)2.病毒数量与感染性测定1.蚀斑形成试验（plaqueformationtest）2.50％组织细胞感染量（50％tissuecultureinfectiousdose,TCID50）感染性病毒量2.病毒形态学鉴定电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），对一般病毒检测意义不大3.病毒血清学鉴定用已

5、知的抗体，鉴定病毒种、型、亚型(1)血凝抑制试验--—正粘病毒型与亚型鉴定病毒＋鸡红细胞＝凝集（血凝试验）病毒＋特异性抗体＋鸡红细胞＝不凝集（血凝抑制试验）(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA）——多种病毒鉴定三、病毒分子生物学鉴定抗原变异病毒基因的鉴定核酸扩增核酸杂交基因芯片基因测序四、病毒感染的血清学诊断应用：①采取标本分离病毒为时已晚②目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒③为证实所分离的病毒的临床意义④进行血清流行病学调查等1.中和试验（neutralizingtest）病毒＋中和抗体病毒失去感染性特点：特异性高，抗体维持时间长应用：人群免疫情况的调查临床诊断少用五、病

6、毒感染的快速诊断数小时内出结果病毒颗粒病毒成分（抗原或核酸）早期抗体检测（IgM）病毒的快速诊断光镜-----包涵体电镜免疫荧光ELISA分子生物学技术杂交SouthernblotPCRNorthernblot第二节病毒感染的防治原则灭活疫苗（inactivatedvaccine）活疫苗（livingvaccine）重组载体疫苗（recombinantcarriervaccine）亚单位疫苗（subunitvaccine）化学提取或人工合成疫苗重组疫苗（recombinantvaccine）核酸疫苗（nucleicacidvaccine）一、人工主动免疫常用生物制品