细胞培养试剂的配制.doc

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1、细胞培养试剂的配制一、Hank,s液配方：KII2P040.06g,NaCl&Og,NaHCOBO.35g,KC10.4g,葡萄糖l.Og,Na2HP04・H200.06g,加H20至1000ml注：Hank's液可以高压灭菌。4°C下保存。二、磷酸盐缓冲液(PBS)的配制母液的配制：0.2MNa2HPO4：称取71.6gNa2HPO4-12H2O,溶于1000ml水0.2MNaH2PO4：称取31.2gNaH2PO4-2H2O,溶于1000ml水各种浓度PB(pH=7.4)的配制：先配0.2MPB(pH=7.4

2、,100ml)：取19ml0.2mol/L的NaH2PO4,81ml0.2mol/L的Na2HPO4,即可。然麻只需将0.2MPB(pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如：0.1MPB(PH=7.4):取500ml0.2MPB,加水稀释至1000ml即可。0.0IMPB(PH=7.4):取50ml0.2MPB,加水稀释至1000ml即可。0.02MPB(PH=7.4):取100ml0.2MPB,加水稀释至1000ml即可。若需要NaCl的话，加入NaCl至0.9%(g/100ml)即可。三、胰蛋白酶溶液的配制配

3、制胰蛋白酶时，要注意药品的牌号，活性及保存时间。不同的牌号、质量会有差别，更重要的丿应注意酶的活性。配制时，应按所标活性（一般活性为1：250）配制最适浓度的溶液。配制方法下:0.25%臍蛋白酶（活性1：250）溶液的配制:1：250胰蛋白酶0.25gHank液100ml配制时，先用少量Hank液溶解胰蛋白酶，然后再将余液加入。置于370C水浴屮，溶解lh（时间长短取决于溶解稈度，待溶液全部透彻清亮为止）。溶解后，用除菌滤器过滤，无菌分装,密封，贴好标签，置于低温冰箱（・2（）°C）保存。使用前，用7.4%NaH

4、CO3调PH至7.6・7.8。四、0.25%胰蛋白酶・（）・（）2%EDTA混合消化液胰蛋白酶（Trypsin）粉0.25gEDTA粉20.0mgO.Olmol/LPBS100ml先用少量PBS溶解膜蛋门酶，然麻将EDTA粉末和剩下的液体加入混介，置37°C水浴屮1小时左右（待彻底溶解，液体呈透明为止），用滤雅过滤，分装置・20°C冰箱屮保存。五、青（1（）0单位/ml）・链霉素（0.1mg/ml）的配制配制时，将上述两种药品溶解于生理盐水（或Hank液）100ml'po然麻用除菌滤器过滤（或在无菌间内，用灭菌的

5、盐水配制亦可），分装于青霉素瓶屮，放冰箱（或・20°C）保存，备川。使用时，可按100单位/ml稀释。青霉素：X0力单位/ml—瓶用培养液8ml稀释，备用。链霉索：lg—瓶用培养液2ml稀释，备用。保存：4°C或・20°C保存。500ml培养液加入以上配好的0.5ml青霉素，0.1ml链霧素。六、（）.5%台盼蓝染液的配制台盼蓝0.5g,溶于lOOmlPBS液屮。待溶解后，过滤以去除不溶解的杂质。检杳细胞活力时，取20ul细胞悬液加20ul台盼蓝染液，3〜5分钟际观察及用计数板计数，此时，活细胞透明无色，死细胞被

6、染成均匀蓝色，但不得超过15min。七、血清灭活1、从冰箱屮取出血清瓶，放入装有清水的盆屮，放入4度冰箱中自然融化；2、融化后尽快把血清瓶放入56°C水浴屮，水面超过血清面约1〜2cm；3、每5分钟晃动血清瓶，摇匀血•清。灭活30分钟丿丘，取出血清，放入冷水浴屮复温。冻存于・20°C或分装后冻存。注：血清必需先经灭活补体后才能使用。血淸在・20度可保存1〜2年。