SNT 1200-2003 烟草中转基因成分定性PCR检测方法.pdf

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1、SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1200-2003烟草中转基因成分定性PCR检测方法ProtocolofqualitativePCRforthedetectionofgeneticallymodifiedcomponentsintobacco2003-03-17发布2003-09-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局SN/T1200-2003月U吕本标准的附录A是资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国云南出人境检验检疫局。本标准主要起草人:徐自忠、贾建军、周晓黎、旦有民、周力兵。本标准系首次

2、发布的检验检疫行业标准。SN/T1200-2003烟草中转基因成分定性PCR检测方法范围本标准规定了烟草中转基因成分定性PCR检测方法。本标准适用于对新鲜和干的烟叶、种籽及烤烟等的转基因成分进行定性检测和鉴定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SN/T1193基因检测实验室技术要求SN/T1工9

3、4植物及其产品转基因成分检测抽样和制样方法SN/T1204植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法3术语、定义和缩略语下列术语、定义和缩略语适用于本标准。3.1术语和定义3.1.1转基因transgene将物种本身不具有的、来源于其他物种的功能DNA序列，通过各种导人手段，使其在该物种中进行表达，以便该物种获得新的品种特征。3.1.2聚合酶链式反应polymerasechainreaction，简称PCR模板基因序列先经高温变性成为单链，在DNA聚合酶作用和适宜的反应条件下，根据模板序列设计的两条引物分别与模板DNA两条链上相应的一段互补序列发生退火而相互

4、结合，接着在DNA聚合酶的作用下以四种脱氧核糖核酸(dNTPs)为底物，使引物得以延伸，然后不断重复变性、退火和延伸这一循环，使欲扩增的基因片段以几何倍数增加。3.2缩略语3.2.1UNG:uracilDNAglycosylase，尿啼咙DNA-糖基酶。3.2.2EDTA:ethylenediaminetetraaceticacid，乙二胺四乙酸。3.2.3CTAB:十六烷基三乙基澳化钱。3.2.4TMV-CP:tobaccomosiacviruscoatprotain，烟草花叶病毒外壳蛋白基因。3.2.5CMV-CP:cucumbermosiacviruscoatpr

5、otain，黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因。3.2.6TMV-54KD:tobaccomosiacvirus54KDgene，烟草花叶病毒54KD蛋白基因。3.2.7BT:BacillusThuingensissubsp，苏云金杆菌杀虫蛋白基因。3.2.8PVY-CP:potatovirusYcoatprotain，马铃薯病毒Y外壳蛋白基因。3.2.9TBEoTris碱、硼酸、EDTA缓冲液。3.2.10NPT-11:neomycin-3'-phosphotransferasegene，新霉素-3'-磷酸转移酶基因。3.2.11NOS:terminatorofnopaline

6、synthasegene，胭脂碱合成酶基因终止子。3.2.12CaMV35S:35Spromoterfromcauliflowermosaicvirus，来自于花椰菜花叶病毒的35S启1SN/T1200-2003动子，3.2.13Tris:tris(hydroxymethyl)aminomethane，三(经甲基)氨基甲烷。3.2.14DNA:deoxyribonucleicacid，脱氧核糖核酸。3.2.15dNTPs:dTTP,dATP,dCTP,dGTP,3.2.16dTTP:deoxyribonucleosidetriphosphate，脱氧胸昔三磷酸。3.2.

7、17dATP:deoxyadenosinetriphosphate，脱氧腺昔三磷酸。3.2.18dCTP:deoxycytidinetriphosphate，脱氧胞昔三磷酸。3.2.19dGTP:deoxyguanosinetriphosphate，脱氧鸟昔三磷酸。3.2.20dUTP:deoxyuridinetriphosphate，脱氧尿昔三磷酸，3.2.21by:basepair,碱基对4原理转基因植物是经过了基因修饰的植物即其本身的基因组中有外源基因的导人，其基因组中含有外源成分。转基因植物是为了使植物获得抗病、抗虫、抗除草剂、提