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时间：2020-04-12
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1、免疫荧光技术间接免疫荧光法测ANA兰州大学基础医学院免疫研究所梁亚玲实验原理以小鼠肝细胞或某些培养细胞（如人喉癌上皮细胞HEP-2）作为抗原片，将病人血清加到抗原片上。如果血清中含有ANA，就会与细胞核成分特异性结合。加入荧光素标记的抗人IgG抗体，又可与ANA结合，在荧光显微镜下可见细胞核部位呈现荧光。试剂与器材抗原片（自行制备）、异硫氰酸荧光素标记的抗人IgG抗体（购买）、0.01MPBS、待测血清、阳性与阴性对照血清。器材：荧光显微镜、孵箱、有盖湿盒（内铺浸湿海绵或纱布）、吸管、试管等。实验步骤1.制备小鼠肝印片（方法见实验指导），每张玻片轻印两处，分别用记号笔标记。2.待测血清
2、和对照血清用PBS作1：10稀释，滴加于抗原片上，放湿盒内，37℃温浴30min。3.取出抗原片，用流水冲去未结合的血清，置PBS（1、2、3缸）中浸洗，每缸5min，吹干。4.滴加稀释的FITC-抗人IgG抗体，置湿盒内，37℃孵育30min。幻灯片75.同步骤3浸洗，吹干。6.滴加缓冲甘油封片，荧光显微镜检查。结果观察细胞核发黄绿色荧光为阳性染色细胞（本实验中为ANA阳性），不发荧光为阴性。注意细胞核着染荧光的图像类型：均质型、周边型、斑点型、核仁型及混合型。实验讨论注意事项：抗原片应用前需吹干；待检血清应保证新鲜。方法评价：间接免疫荧光技术是检测ANA最常用的方法。由于鼠肝印片细
3、胞分布布均匀，多有重叠，冲洗时易丢失。目前临床检测采用核大、有丝分裂旺盛、核内细胞器较明显的HEP-2细胞作为基质片。
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