几种谷胱甘肽的检测方法

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1、山东食品发酵专刊专题2007.3(总第146期）几种谷胱甘肽的检测方法陈俭梅1周琳2（1.山东师范大学生科院济南250014）(2.山东大学医学院济南250014)摘要测定谷胱甘肽含量的方法有多种，目前还没有一种既快速、稳定、特异，又十分灵敏、经济的测定方法。本文对谷胱甘肽的各种测定方法作一综述。关键词谷胱甘肽检测GSH存在于所有生物细胞中，而以酵母、谷物较好，但需用对羟基汞苯甲酸和萤光黄；荧光法容种子胚芽、人体和动物的心脏、肝脏、肾、红细胞易受干扰，误差较大；乙二醛酶法需要复杂的技术和眼睛晶状体中含量较高。正常人体内还

2、原型谷和设备[2]。目前测定谷胱甘肽含量的方法有多种，胱甘肽和氧化型谷胱甘肽（GSSG）的比例为100：1，如酶循环法、比色法、荧光光度法、流式细胞仪法、全血中GSH的正常浓度约为37.1mg/dl，人体的肝滴定法、高效毛细管电泳法和近些年发展的高压脏和肾脏是GSH主要的合成、代谢和排泄器官。谷液相色谱法等，这些方法各有其优点，但也都有不胱甘肽的主要生物学功能是保护生物体内蛋白质足，目前还没有一种既快速、稳定、特异、又十的巯基进而维护蛋白质的正常生物活性，同时它分灵敏、经济的测定方法，谷胱甘肽的测定方法有又是多种酶的辅酶

3、和辅基。GSH的重要生物学功待进一步的发展和完善。下面对目前常用的几种能与谷胱甘肽的分子结构有密切关系，例如GSH主要的测定方法做一介绍、比较和评价。分子中的巯基参与中和氧自由基、解毒等重要功能；所含的γ-谷氨酰胺键能维持分子的稳定性并1酶循环法必参与转运氨基酸；GSH中的甘氨酸和半胱氨酸其测定原理为氧化-还原反应：GSH被DTNB残基参与胆酸的代谢等[1]。（5，5′-dithiobis-2-nitrobenzoicacid;5,5′-二巯近年来，随着对GSH的生理、生化等方面研基-2-硝基苯酸）氧化，生成GSSG和稳

4、定的TNB究的深入，GSH在医学、食品、保健、防衰老等方(5-thio-2-nitrobenzoicacid；5-巯基-2-硝基苯酸)；面正引起人们日益广泛的注意。谷胱甘肽（GSH）GSSG与GSSG还原酶及NADPH（还原型烟酰胺用途广泛，用基因工程微生物生物合成方法是生腺嘌呤二核苷酸磷酸)反应,还原生成GSH。在产谷胱甘肽的主要方式。作为前体之一，半胱氨酸NADPH与GSSG还原酶维持GSH总量不变的条件的浓度较高，对谷胱甘肽的测定有干扰。已有几种下，GSH和DTNB反应生成TNB的速率与样本中方法用于半胱氨酸存在时

5、谷胱甘肽的测定：酶分总谷胱甘肽成正比。TNB于412nm波长处有最大析方法可测高达1000倍半胱氨酸存在时谷胱甘肽吸光度，可以通过分光光度计来测定总谷胱甘肽的含量，结果较准确，但需价格昂贵的辅酶Ⅱ和谷水平（GSH+GSSG）[3]。酶法测定谷胱甘肽，样本的胱甘肽还原酶，并且后者活力变化严重影响测量制备要迅速，因为GSH很容易氧化而使其浓度降结果；色谱法冗长费时；Jocelyn采用将样品在硫低。本法还可测定GSSG水平。酸中煮沸1h的方法，不太安全；Wronski方法效果酶循环法最初由Owen和Belcher提出,之后由-

6、26-ShandongFoodFermentation2007.3(总第146期）专刊专题山东食品发酵Tietze和Griffith进行了改进。酶循环法是一种灵为99.73%，RSD为1.24%。Hissin等[8]选用OPT敏、快速的方法，其最大优点是灵敏度高，可测定作荧光剂，采用偏磷酸-磷酸钠-EDTA缓冲溶液含量仅0.1μmol/L的样品,回收率93%-106%。（pH8.0），用以测定哺乳动物心脏和肝脏中谷胱甘Manju等认为此方法灵敏度高，但特异性不高，这肽的含量，谷胱甘肽的检测限为0.05umol，线性是由于

7、DTNB可与许多含活性巯基基团物质反应。范围为0.05~0.8umol,RSD为4%。但此法不足之处在于其测定的是谷胱甘肽总量张建莹等[9]探讨了金属离子对还原型谷胱甘肽（GSH+GSSG），不能区分GSH和GSSG；另外样（GSH）-邻苯二甲醛（OPA）体系荧光信号的影响，本的准备也比较严格，要求控制采血至测定时间实验结果表明Zn2+对体系的荧光信号有增强作用，间隔在3min内，否则将影响测定，使实际应用受而且Zn2+能够提高GSH-OPA体系的稳定性，据此到很大限制。MargaretA.Baker等将酶循环法与微建立

8、了一种以Zn2+作为荧光增强剂，快速简便测定量滴定板技术相结合，设计了一种快速、敏感、简还原型谷胱甘肽的新方法。GSH在1.3×10-8~1.4便的测定大数量生物样本的GSH、GSSG的方法。×10-6mol/L的范围内其浓度与体系相对荧光强度其最大优点是可同时测定大量的样本。为了提高有良好的线性关系，检出限为1.1