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《榄香烯诱导肺癌A细胞凋亡作用剂量和时间依赖性研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、·136·中国现代药物应用2009年3月第3卷第6期ChinJModDrugAppl,Mar2009,Vol.3,No.6榄香烯诱导肺癌A549细胞凋亡作用的剂量和时间依赖性研究许浪刘丹晏丹李玉红成肇智【摘要】目的探讨榄香烯对肺癌A549细胞的增殖抑制作用及其对细胞凋亡的影响。方法每批细胞按空白对照组和药物处理组随机分组,检测榄香烯对癌细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞光度分析术(FCM)检测细胞凋亡率及细胞周期时相分布,同时进行细胞的形态学观察。结果榄香烯存在剂量依赖性和时间依赖性,榄香烯在48h、7
2、2h对A549细胞周期有明显影响;榄香烯可阻滞A549细胞于S期并诱导细胞凋亡,但细胞凋亡率并不完全与药物浓度成正相关。结论榄香烯对肿瘤细胞具有较强的增殖抑制作用,在一定药物浓度范围内,随药物浓度的增加榄香烯可使细胞凋亡率升高,但超过一定作用浓度,药物的细胞毒作用增强,细胞凋亡率则呈下降趋势。【关键词】榄香烯;肺癌A549细胞;细胞凋亡榄香烯是近年来我国首先从活血化瘀中药温莪术挥中态、大小及细胞群体生长情况的不同;照相并记录实验结果。提取的一种抗癌有效成分。药理学试验表明,其抗癌疗效确114统计学方法
3、运用SPSS1115进行统计分析,多组间比[1]切、毒副作用小、抗瘤谱广,具有广阔的应用前景。现已证较采用方差分析,组间两两比较采用q检验,按α=0105为[2]实诱导肿瘤细胞凋亡是其抗癌作用机制的重要方面之一。检验水准。本实验在以往研究的基础上探讨了榄香烯在不同药浓度时2结果对肺癌A549细胞凋亡的影响,以期为榄香烯临床上能更合211榄香烯对A549细胞周期的影响榄香烯存在剂量依理有效地用于肺癌治疗提供一些实验依据。赖性和时间依赖性,榄香烯在24h对A549细胞周期无明显1材料与方法影响,48h,7
4、2h榄香烯对A549细胞周期有明显影响,剂量111材料和主要试剂榄香烯乳注射液由大连金港制药有上榄香烯80μg/ml比40μg/ml作用更明显,其作用环节主限公司提供:肺腺癌细胞株A549由重庆医科大学检验系临要是影响细胞周期S期向G2、M期的转变过程,将肿瘤细胞床生化教研室惠赠;A54培养在加10%胎牛血清(杭州四季阻滞在S期,减少进入G2、M期的细胞数目抑制肿瘤细胞生青公司)的RPMI1640培养液(Hydone产品),内含青、链霉长代谢,减少其有丝分裂,导致肿瘤细胞数目减少。同时,时素10万/L
5、,细胞在37℃5%CO2培养箱培养;MTT为Sigma间上24h无明显影响,72h和48h对A549细胞周期的影产品,二甲亚砜为分析纯,重庆东方试剂厂产品。响无明显差异,因此,我们认为榄香烯80μg/ml作用48h,抑112主要仪器流式细胞仪(FACScmaBectonDickison美制A549细胞生长的效果最明显。国),透射电子显微镜(HITACHI2600型日本),自动酶标读212榄香烯对A549细胞凋亡的影响细胞形态学观察结数仪(Bio2Rad22500型美国)。果显示,随药物浓度的增加细胞生
6、长密度逐渐下降,正常的113方法多边形细胞形态中异形细胞逐渐增多。与空白对照组细胞11311榄香烯对肺腺癌细胞生长的抑制作用噻唑蓝还原相比,在0101mg/ml的药物浓度作用下,细胞变化不明显;法(MTT法)测定,用新鲜培养液配制榄香烯,使其终浓度成在0.04mg/ml的药物浓度作用下,则可见体积缩小、胞核固为10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml。取对数生长期缩的圆形细胞即凋亡细胞明显增多;在0108mg/ml的药物的细胞,用胰酶消化,台盼蓝计数,用RPMI1640将A549
7、稀浓度作用下除了以上明显变化外,尚可见许多散在膨大、染4释成1×10/ml单细胞悬液,取96孔板三块,每孔加200μl色质疏松的不规则形细胞即坏死细胞,有些甚至已发生胞膜稀释好的细胞,再加20μl已配制不同浓度实验药物.设试剂破裂,且细胞生长受抑情况明显可见;在0110mg/ml脑梗死对照(每孔加1640培养液200μl)和肿瘤细胞阴性对照,置的药物浓度作用下,上述表现更加明显;在0116mg/ml脑梗37℃5%CO2培养箱,每组设8个复孔,培养24h,48h和72h死的药物浓度作用下,则可见大量细胞
8、从瓶壁脱落形成细胞后,每孔分别加5mg/mlMTT20μl,同样条件再保温4h,小碎片,细胞形态大小不一,正常的细胞形态几乎不曾观察到,心吸取上清液,每孔加200μlDMSO,置于微震荡器上震摇大多为圆形固缩细胞或不规则形膨大细胞。5min混匀。置于酶标仪上,以波长570nm,试剂对照组调3讨论零,测光密度值OD。按下式可计算出各浓度组的抑制率。诱导肿瘤细胞凋亡是榄香烯抗癌作用机制的重要方面以上实验各重复3次,求平均值。之一,从本实验结果来看,也确实证实
