vydac色谱柱注意事项

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1、色谱柱维护与使用指南：关于Vydac®产品色谱柱维护与使用指南：：：关于：关于Vydac®产品此指南的目的是提供一些信息来帮助您成功使用VYDAC®HPLC柱。在以下部分详细描述了常规建议与对一些特殊柱的推荐方法：第一部分常规建议第二部分蛋白质/肽反相色谱柱第三部分201TP特殊反相色谱柱第四部分302IC离子色谱柱第一部分
当开始使用您的VYDACHPLC柱时除去每根柱子两端的柱堵头。我们推荐使用PEEK材质的Finger-Tight™（手拧）接头以确保1/16”不锈钢管或PEEK管与柱的进口端和出口端的紧密相连。这种PEEK接头可向格雷斯戴维森探索科技购买

2、（例如：Alltech产品货号#32233）或由您的本地经销商提供。对于2.1mm内径和4.6mm内径的色谱柱，不锈钢压缩式接头（10-32UNF,CPI标准）也能使用。
柱保护柱的使用寿命能够通过在使用前过滤所有溶剂和样品来延长。我们建议在注射器和柱之间使用低死体积在线过滤器（可由格雷斯Vydac提供：货号CPF10，每包10个）以捕集过滤来自溶剂、泵、混合室以及注射器中的任何微粒。如果样品存在不溶物质或强吸附物质会阻塞色谱柱时，我们也建议使用保护柱。大多数VYDAC®HPLC柱都有相应的柱芯式保护柱。
压力与温度限制VYDAC®硅胶基HPLC柱能够在0-6

3、0°C及压力不超过5000psi(335bar)的情况下使用。VYDAC®硅胶基反相色谱柱的典型背压是：粒径(µm)柱规格(mm)流速(mL/min.)典型背压(乙乙乙腈乙:水水水50:50)52.1x2500.21000–1800psi54.6x2501.01000–1800psi54.6x1501.0600–1200psi510x2505.01000–1800psi104.6x2501.0500–1000psi1010x2505.0500–1000psi1022x25025500–1000psi
如果您的VYDAC色谱柱碰到麻烦时HPLC柱会被某些吸附能力

4、强的样品成分污染，导致柱的背压升高或者分离度的损失。当色谱柱看起来像是被污染时：色谱柱维护与使用指南：关于Vydac®产品1.如果背压过高，从系统上取下色谱柱并且运行泵以确保背压是由色谱柱引起的而不是HPLC系统自身产生的压力。2.如果是色谱柱导致背压过高，那么将色谱柱逆向冲洗以尝试冲洗除去入口筛板处的污染物。反向冲洗时，先由低流速开始（内径为4.6mm的色谱柱用0.5mL/min的流速）持续10-15分钟，然后再将流速增大至1.5-2.0mL/min（内径4.6mm的色谱柱）。3.清洗色谱柱可以使用10-20倍柱体积的强洗脱液（反相色谱柱用高浓度有机溶剂；离

5、子交换色谱柱用高浓度盐溶液）或者运行2-3次“空针”（即没有样品注射）执行常规运行所用的梯度洗脱来除去吸附能力不是很强的污染物。第二部分VYDAC蛋白质/肽反相色谱柱：：：208、、、214、、、218、、、219、、、238－－－TP以及MS;238EV除了238TP,238MS和238EV之外，其它VYDAC®硅胶基反相HPLC色谱柱都含有通过使用多取代氯硅烷化试剂与“多孔性”300Å孔径的硅胶化学键合而得到的键合相，这些“聚合式”反相键合相具有很好的抗水解能力。VYDAC®238MS,238TP和238EV填料是使用单硅烷化试剂反应所得的“单点式”C18

6、键合相。键合方式的不同能提供微妙不同的色谱选择性，有助于优化肽和蛋白质的分离条件。238TP、238MS和238EV填料都是经过彻底封尾的填料。
性能测试每批反相填料都使用一套肽混合标样和一套蛋白混合标样来测试其选择性。（219MS和219TP只用蛋白质标样测试，238MS和238TP只用肽标样测试）。每根色谱柱再用联苯（用于分析柱）或苯甲酸酯（用于制备柱）来单独测试其装填柱效。测试条件与结果包含在产品所附文件中。如果您想测试或确认色谱柱的性能，我们建议您重复选择性测试和/或柱效测试。
运输VYDAC®蛋白质/肽反相色谱柱的贮存/运输溶剂为乙腈:水（其比例为：

7、C4柱与联苯基柱为50:50，C8和C18柱为60:40）。制备型柱的贮存/运输溶剂为甲醇:水。
柱的预处理因为反相填料表面的特性，柱的性能（分离度，保留度）也许会在多肽样品的初始几次进样测试过程中发生轻微的改变。“色谱柱的稳定化过程”多发生于分子量大于10,000MW的大多数多肽或蛋白样品。可以通过重复注射多肽直至该柱的特征保持稳定来使该柱稳定化（对于4.6mmID×250mm柱通常需要注射100µg左右的多肽样品），或者也可以注射100µg的常见蛋白质核糖核酸酶，而后进样后用典型的含有0.1％TFA的水/乙腈梯度来冲洗色谱柱。
柱保存VYDAC®蛋白质/肽

8、反相色谱柱可以保存于任何有机溶剂与水的