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1、新医学2005年6月第36卷第6期359检结核病的实验室快速诊断查与重庆医科大学附属第一医院肺科(400016)彭丽罗永艾临床[关键词]结核病传染病结核分枝杆菌诊断1引言212新型培养技术结核病是由结核分枝杆菌(结核杆菌)引起的慢性传20世纪80年代,建立了结核杆菌自动及半自动液体染病,几乎全身各组织器官均可发生,以肺结核最为常见,培养体系,培养时间明显缩短,包括有放射性的占90%。WHO报告显示,近10年来,结核病以极为迅猛BACTEC460培养体系和无放射性的MB/BACT、的势头再次肆虐全球,目前已跃升为人类健康的头号杀手,BACTEC960、MGIT培养体系。B
2、ACTEC460培养体系平均9估计每年有800万～1000万新发病例,约300万人死于结日即可判定结果,敏感性好,培养速度快,但存在放射性核病。2000年我国第4次结核病流行病学调查资料显示,污染,临床应用逐渐减少。目前临床应用较广的是我国每年新发病例约450万,死亡13万。疫情严峻的原因BACTEC960、MGIT,两者的敏感度和培养速度基本等同于与临床诊断技术和新药研制滞后,防治不力,结核杆菌与BACTEC460,但明显高于固体培养,缺点是污染率稍高。人类免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiencyvirus,HIV)近年又出现了一种快速变色培养基,检出
3、时间、阳性检出双重感染以及耐药结核病人数的急剧增加等有关。早期发率与BACTEC960、MGIT相当,且污染率低。现和早期诊断结核病病人,给予有效的治疗,是减少传播213噬菌体生物扩增法机会、控制结核病疫情的关键环节。噬菌体生物扩增法(phageamplifiedbiologicallyassay,近20年来,结核病的实验室诊断取得了较大的发展,PhaBassay)是近几年发展起来的一种间接检测标本中结核建立了更为快速、准确、敏感的方法,其中在细菌学、分杆菌活菌的快速诊断方法,是一种表型技术。基本原理是子生物学、免疫学和发光技术4方面成果较为显著,现就D29噬菌体在适宜
4、条件下感染标本中活的结核杆菌,将其这4个方面的快速诊断方法分别介绍如下。DNA注入结核杆菌菌体内,进行增殖,最后裂解结核杆2细菌学诊断菌,释放的子代噬菌体又感染一种快生长分枝杆菌,在24小时内形成清晰的噬菌斑。由于噬菌体不能感染死的结核211传统方法杆菌,因此PhaB法可以区别结核杆菌是活菌或是死菌,这标本涂片抗酸染色法是应用最长久、最广泛、最为简一点是其它快速诊断方法不能相媲美的。此法敏感度高,便的检测结核杆菌的方法。痰标本直接涂片的阳性检出率2610/L以上的活菌即能检出。从收到痰标本进行前处理到不高,一般在30%～40%,痰液中菌量必须多于5×10/L检测结果出来
5、仅需48小时,无需特殊仪器,成本低廉。才能检出,并且与痰标本的质量、检测者的技术和责任心2003年,国外已有商业性试剂盒生产,并在多个国家和地等有关。浓缩集菌后抗酸染色能提高检测的敏感度,敏感区进行了临床试验,与改良罗氏培养法结果相比,具有敏度可达60%～70%。抗酸染色法简单易行,节约时间,但感性和特异性高的特点,对发展中国家尤为适用。值得一敏感度不高,并且无法区分结核杆菌和非结核分枝杆菌(non2tuberculosismycobacterium,NTM),不能区别死菌与提的是此方法还可对痰标本中的结核杆菌直接进行药敏试验,2～4日可以得到结果,但目前还在实验室研究
6、阶段,活菌。随着HIV感染人群的迅速增加,临床上感染NTM的因缺乏统一的标准,还需要进一步研究。2004年,我们对病例与以前相比有了大幅度的增多,结核病和非结核病所此技术进行了较为系统的研究,发现其敏感度高,但缺点用的药物又有较大的差别。因此,鉴别结核杆菌与NTM就是D29噬菌体对结核杆菌和作为指示菌的NTM均可裂解,成为目前较为急迫而又棘手的问题。Watterson等报道(2000年),在标本中加入某种用荧光素标记,在荧光显微其次,对个别NTM也呈阳性反应,从而影响其特异性。镜下可以鉴别结核杆菌与NTM。3分子生物学诊断结核杆菌检查是诊断结核病的金标准,也是判断活动2
7、0世纪90年代以来,分子生物学在医学领域取得了性、传染性和疗效考核的主要指标,涂片法和培养法应同飞速发展,研究者也将分子生物学的原理引入结核病的实时进行,后者更为重要。传统培养法采用固体或液体培养,验研究。改良罗氏培养基应用最广泛,同时可以进行菌种的初步鉴311聚合酶链反应和其他核酸体外扩增技术定,但需4～6周才能出结果,加上药敏试验还需4周,费PCR是一种根据DNA复制原理设计的体外DNA或时太长,影响临床应用。7H9、7H10、7H11液体变色培养RNA扩增方法,自1989年引入结核病的诊断以来,很快基将结果提前1～2周,阳性率与改良
