山西地区褐土胶质芽孢杆菌生物学特性研究

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1、第30卷第4期草原与草坪2010年89山西地区褐土胶质芽孢杆菌生物学特性研究张晓波，赵艳，樊俊华(1．海南大学农学院，海南儋州571737；2．山西农业大学资源环境学院，山西太谷030801)摘要：从山西地区褐土中筛选出6株胶质芽孢杆菌，以辽宁菌种保藏中心提供的胶质芽孢杆菌(编号KO)为参照菌株，对其形态学、生理生化特性、耐盐性、耐酸碱性、温度敏感性等特性进行了测定。结果表明，这些菌株均为革兰氏阴性杆菌，产生圆形芽孢和丰厚的荚膜，菌落透明隆起，粘性强；过氧化氢酶试验呈阳性，能水解淀粉，VP阴性，不产生吲跺。K5、KO在3NaC1浓度的培养基上能生长；在25～30℃供试胶质芽孢杆菌均能良好

2、生长。研究可为高效胶质芽孢杆菌菌株材料的获得以及研制生物钾肥提供实践及理论基础。关键词：胶质芽孢杆菌；褐土；生物学特性中图分类号：S143．3文献标识码：A文章编号：1009—5500(2010)04—0089～05胶质芽孢杆菌(Bacillusm“fz＆g加5“)俗称钾细进行了形态特征和生理生化特性研究，为生物钾肥的菌，国内一些学者也称为硅酸盐细菌]。长期以来对研制及应用提供基础。于这个种的特性一直有着不同的意见，其分类地位、名1材料和方法称直到1998年才得到国际上承认]。胶质芽孢杆菌是目前应用于生物钾肥中的一种重要功能菌，能分解1．1供试土样及菌株硅酸盐和铝酸盐组成的含钾矿物，也能

3、活化硅、磷等多分离胶质芽孢杆菌的土样分别采自山西地区有代种营养元素供作物吸收利用，同时具有固氮功能_3]。表性的褐土(表1)。近年来我国大部分地区土壤由于长期偏施氮、磷胶质芽孢杆菌参照菌株标记为KO，由辽宁省菌种肥，少施或不施钾肥，使得土壤中钾素被作物大量带走保藏中心提供；从采集土样中分离、筛选的6株胶质芽而得不到补充，从而抑制其他元素的吸收影响了作物孢杆菌菌株，标记为K1、K2、K3、K4、K5、K6。的生长和高产]。因此，在钾肥生产污染严重，成本1．2培养基高，供不应求的情况下，研究开发以成本低，又不污染硅酸盐细菌培养基参照文献进行ET3，蔗糖5．Og，环境的胶质芽孢杆菌为有效活菌的

4、生物钾肥尤为重CaCO30．1g，Na2HPO42．0g，FeC130．005g，MgSO4·要_6]。试验对山西地区褐土中筛选到的胶质芽孢杆菌7H2O0．5g，土壤矿物1．0g，Agar20g，蒸馏水1000mL，pH7．0。收稿日期：2009—12-24；修回日期：2010—03—29土壤矿物为去除有机残体的土壤，取校园土3g，基金项目：海南省自然科学基金(309009)“结缕草根际联加入20HC130mL，煮沸30min，过滤，用蒸溜水淋合固氮菌的分离、鉴定及筛选”；海南省教育厅洗至无氯离子反应。高等学校科研项目(Hj~2010—16)“海南省不同1．3方法暖季型草坪草根际胶质芽孢

5、杆菌遗传多样性及1．3．1根际土样的采集在每个标准样地内按S形解钾活性的研究”资助随机选择5个植株，采集根际土样时先去除表层的落作者简介：张晓波(1978一)，男，山西岢岚人，博士，讲师，从事草坪管理的教学及科研工作。叶以及枯草，然后将植株整个带根系小心挖出，轻轻抖E-mail：angiaoo@126．corn落根系上的大块土壤，用刮刀刮下黏附于根系表面约赵艳为通讯作者。2mm土壤，带回实验室。9OGRASSLANDANDTURF(2010)Vo1．30No．41．3．2分离与纯化采用硅酸盐细菌培养基分离一氮源利用、甲基乙酰甲醇试验(VP试验)、淀粉水解、制备土壤悬液1o一，l0和1O3

6、个稀释度，设3个重明胶水解、脲酶、酪素水解、产吲跺试验、硝酸盐还原试复，涂沫平板法，3O。C恒温培养箱中培养5d。挑选符验、苯丙氨酸脱氨等均按常用方法[11]进行。合文献[8]胶质芽孢杆菌菌落特征的典型菌落，在固体2结果与分析平板上戈0线培养7d，再挑取单个菌落如此重复划线2～3次，同时镜检其纯度，直至获得纯培养。2．1生物学特征1．3．3菌株生物学特性测定(1)将供试菌株接种在2．1．1培养性状胶质芽孢杆菌在无氮的硅酸盐细硅酸盐细菌液体培养基中，置于28℃恒温培养6h，观菌培养基上形成直径7～13mm的无色透明隆起菌察是否形成菌膜、菌环、沉淀或浑浊等特征；用接种环落，像半粒玻璃珠平贴于

7、平板上(图1)；菌落光滑，湿润接菌在平板培养基上划线，28℃恒温培养5～6d，观有光泽，边缘整齐，粘稠，富有弹性，挑起时能拉成很长察并描述其菌落大小、形状、颜色、是否透明、是否粘稠的丝；在液体培养条件下，分离的胶质芽孢杆菌能在培等；(2)用24h菌龄的纯培养物制片革兰氏染色后镜养液底部形成透明的雾状沉淀，沉淀胶结成团，不易摇检观察其染色结果；用淀粉铵盐培养基]培养3d后，散，培养液不浑浊。用芽孢染色法l1观察其着生位置、形状等；用斜