大草履虫总DNA的提取方法比较-论文.pdf

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1、第35卷第2期淮北师范大学学报(自然科学版)V01．35NO．22014年6月JoumalofHuaibeiNormalUniversity(NaturalScience)Jun．2014大草履虫总DNA的提取方法比较朱艳芳，胡建，段永波(淮北师范大学生命科学学院，安徽省资源植物学重点实验室，安徽淮北235000)摘要：快速而稳定地提取大草履虫的基因组DNA是进行后续分子生物学研究的前提．文章通过比较传统SDS法、CTABI法和CTABlI法等提取大草履虫DNA的效果，进一步优化提取方法，获得快速稳定地提取大草履虫基因组DNA的方法．结果表明：用CTABI法提取的DNA浓度低，

2、杂质较多；CTABII提取的DNA电泳时检测不出条带；而SDS法提取的DNA在电泳时带型较整齐，无降解，且DNA的得率和纯度较高，但仍有蛋白质污染．针对蛋白质的去除，用SDS一蛋白酶K法和SDS—NaAc法来提取DNA，经过试验发现这2种方法都能够很好地去除蛋白质，所获DNA样品的纯度和得率都能用于进一步分子试验，而SDS-NaAc法更经济适用．关键词：大草履虫；SDS法；CTABI法；CTABlI法；DNA中图分类号：S884．21文献标识码：A文章编号：2095-0691(2014)02-0061-05大草履虫(Parameciumcaudatum)是一种较为常见的原生动物

3、，身体呈圆筒形，前端较圆，中后部较宽，后端较尖，外形很像一只倒放着的草鞋，所以被称作草履虫．大草履虫因为其个体较大，结构典型、繁殖快、观察方便、容易采集培养等特点，常被作为研究细胞遗传的好材料⋯．目前，国内外对于其生活及生理特性的研究已屡见不鲜．且多年来，遗传学家已经用它研究细胞质遗传、细胞质和细胞核在遗传中的相互作用，以及细胞类型的转变等，取得不少科学成果．运用分子生物学技术，从DNA水平研究大草履虫，可以阐明种间亲缘关系和物种起源，有助于基因文库构建和序列分析等．快速高效地提取高质量的DNA，为草履虫亲缘关系研究、基因组比较、遗传多样性和某些特定基因的标记等后续的分子生物学

4、研究提供参考．尤其在进行群体遗传学研究中需要的研究样本量大，除了对DNA的质量和数量有要求外，还需要方法简便易行．本试验分别采用SDS法、CTABI法和CTABⅡ法[2-4]对大草履虫进行基因组DNA的提取，从中筛选出合适的方法，并逐步完善，以便能够快速稳定地获得大草履虫的基因组DNA．1材料与方法1．1材料实验室提供的大草履虫纯培养液，约950只／mL．取大草履虫培养液20mL，置于2个10mL离心管中，5000r／min离心5min．弃去上清液保留大草履虫沉淀，用无菌水离心洗涤2次，合并沉淀，作为试验材料．1_2仪器设备PHS一4CT型精密pH汁、高压灭菌锅、TG16一WC

5、型台式高速离心机、SHH—W21—4203用电热恒温水浴锅、微量移液器、紫外分光光度计(BECKMANCOULTER)、DYY一6C型电泳仪、Tamon1600凝胶成像系统等．1．3主要药品及试剂收稿日期：20l3一l2—18基金项目：淮北师范大学教研资助项目(jy110229)；淮北师范大学细胞生物学精品课程建设项目作者简介：朱艳芳(1980一)，女，河南温县人，硕士，讲师，研究方向：生物技术研究．62淮北师范大学学报(自然科学版)2014年DNAMarker、Tris碱、浓HC1、乙酸、CTAB、JB一巯基乙醇、EDTA、SDS、琼脂糖、溴化乙锭(EB)、氯仿、异戊醇、饱和

6、酚、无水乙醇、冰醋酸、氯化钠(NaC1)、醋酸钠(NaAc)等(试剂均为分析纯)；SDS裂解液：150mmol／LNaC1、2％SDS、50mmol／LEDTA、20mmol／LTris—HC1、pH8．O；CTABI裂解液：100mmol／LTris—HC1、20mmol／LEDTA、1．4mol／LNaC1、4％CTAB、0．2％一巯基乙醇(现配现用)、pH8．0：CTAB11缓冲液：200mmol／LTris—HC1、50mmol／LEDTA、0．14mol／LNaC1、2％一巯基乙醇(现配现用)、pH8．0；CTABI1裂解液：100mmol／LTris—HC1、50m

7、mol／LEDTA、1．4mol／LNaC1、3％CTAB、1％JB一巯基乙醇(现配先用)、pH8．O；TE缓冲液：10mmol／LTris—HC1、1mmol／LEDTA、pH8．0；TAE电泳液：0．04mol／LTris—HAc、0．002mol／LEDTA、pH8．0．1．4大草履虫的DNA提取1_4_13种方法粗提比较(1)传统SDS法(2)CTABI法①裂解．向草履虫沉淀中加入1．5mLCTABI裂解液，混匀，60水浴30～40min；②其余步骤同传统SDS法．(3)CTAB11