不同核酸提取方法用于 HBV DNA 定量检测的比较-论文.pdf

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1、国际检验医学杂志2014年9月第35卷第17期IntJLabMed，September2014，Vo1．35，No．17·经验交流·不同核酸提取方法用于HBVDNA定量检测的比较胡建勇，吴枚，李鑫。(1．甘肃省定西市人民医院检验科，甘肃定西743000；2．甘肃省庄浪县中医医院检验科，甘肃庄浪744699)摘要：目的探讨两种国产乙型肝炎病毒(HBV)DNA荧光定量检测试剂的临床应用价值。方法选取于该院就诊的慢性乙型肝炎惠者共176例，分别用两种国产HBV核酸定量检测试剂测定其HBVDNA水平。比较分析“煮沸法”的A试剂与“一步法”的B试剂的线性范围及其灵敏度。

2、结果176例慢性乙型肝炎患者血清标本用两种试剂检测，A试剂检测为阳性的样本有71例，阳性率为4O．3(71／176)；B试剂检测为阳性的样本有12O例，阳性率为68．2(12o／176)。阳性率的一致性为1OO，阴性率的一致性为53．3，总的一致性为72．2。结论两种国产HBVDNA检测试剂盒对于HBV载量在低复制水平的血清标本具有很好的可比性，B试剂的扩增效率高、操作简便、定量结果准确、线性范围广等优点，具有较好的临床应用价值。关键词：乙型肝炎病毒；国产试剂盒；低病毒载量；煮沸法；一步法D0l：10．3969／j．issn．1673—4130．2014．17

3、．054文献标识码：B文章编号：1673—4130(2014)17-2387—02肝脏足人体最大的腺体，是新陈代谢的关键器官，乙型肝1Omin；之后13000r／min离心10min，取上清2L上机检测。“炎病毒(HBV)等嗜肝类病毒会引起肝细胞损伤以及肝脏炎一步法”的B试剂操作：首先将5L的“核酸释放剂”加入八症，影响肝脏功能的正常发挥。最近，基因检测技术不断飞速联管中，然后分别加入5I血清，阴、阳性对照以标准品，吸打发展，分子诊断在肝病的诊疗和监测中发挥着非常重要的作3～5次混匀。每管加入40~LPCR反应液，盖上管盖上机用，HBVDNA定量检测现已成为H

4、BV复制监测最常用的手检测。段，可以直接检测HBV核酸水平，从而观察抗病毒药物疗效1．4统计学处理统计学处理在SPSS17．0软件上进行，阳和预后，进而指导抗病毒药物应用，对乙型肝炎临床诊断及治性率的比较采用Y检验；HBVDNA载量检测结果经对数转疗有较大的指导意义。近年来，随着核酸及核酸类似物、聚乙换后用-_4S表示，组间比较用配对样本t检验；P<0．05为差二醇干扰素等抗病毒药物的问世，使得慢性乙型肝炎临床抗异有统计学意义。病毒治疗取得了较大进步，同时对乙型病毒肝炎的实验室检测2结果的灵敏度和精确度也提出了新的要求i。本研究结合了1762．1A、B两种试剂

5、检测结果一致性分析本研究中将HBV例乙肝患者的血清学指标和转氨酶水平，比较了用于HBVDNA水平大于500IU／mI作为结果阳性的判断标准，反之则DNA水平检测的两种不同的核酸提取方法，旨在为I临床诊疗为阴性。使用A试剂的最终检测结果中有71例阳性样本，阳提供帮助。性率为40．3(71／176)；B试剂有120例阳性样本，阳性率为1资料与方法68．2(12o／176)。阳性率的一致性为100，阴性率的一致1．1一般资料选取2012年8月至12月于本院进行治疗的性为53．3，总的一致性为72．2，见表1。176例慢性乙型肝炎患者，男性128例、女性48例，年龄表

6、1使用“煮沸法”A试剂与“一步法”B试剂的(39．9-+-13．4)岁。纳入研究对象时排除药物性肝炎、酒精性肝检测结果()炎及其他病毒性月1：炎。诊断依据为中华医学会肝病学分会与中华医学会感染病学分会在2O1O年修订的《慢性乙型肝炎防治指南》中的标准[。所有待检标本均为空腹抽血，3000r／min离心后，低温保存待检。1．2仪器与试剂乙型肝炎核酸定量检测A试剂由国内某厂家提供，最低检测限为500IU／mI，试剂批号20120911，A试剂采用“煮沸法”提取核酸；HBV核酸定量检测B试剂由湖南圣湘生物公司提供，批号为2012009，最低榆测限为100iu／mI，

7、B试剂采用“一步法”提取核酸。仪器为美国应用生物系2．2不同乙型肝炎两对半模式下两种试剂检测结果阳性率比统公司生产的ABI7300荧光定量PCR分析仪。乙型肝炎五项较经统计176例乙型肝炎患者中HBV标志物检测为乙型(EIISA法)检测试剂由厦门新创公司提供，检测项目包括乙肝炎表面抗原、e抗原、核心抗体三项阳性(简称“大三阳”)患型肝炎表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体、核心抗体。使用的者59例，A试剂检测结果呈阳性为44例，阳性率为74．6仪器包括湖南凯达有限公司生产的TGI一16A型低温高速冷(44／59)；B试剂检测结果呈阳性为55例，阳性率为93．2冻

8、离心机，中科美菱生产的低温冰箱，转氨酶