大豆GmOLPa基因的蛋白序列分析及原核表达-论文.pdf

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1、生物技术通报·研究报告·BIOTECHNOLOGYBULLETIN2o12年第9期大豆GmOLPa基因的蛋白序列分析及原核表达田智蕊韩红武志海李东哲杨美英(吉林农业大学，长春130118)摘要：以盐诱导后的大豆根为材料，提取总RNA，RT—PCR得到GmOLPa目的片段。对其蛋白序列分析表明，该蛋白属于GH64．TLP—SF同源超家族中的PR一5蛋白，第25—244位氨基酸是其保守结构域，与番茄中的PR．5亲缘关系最为接近。构建GmOLPa基因ORF的原核表达载体pET一28一GP，并对其在大肠杆菌BL21中的表达条件进行优化。SDS—PAGE证实重组质粒能够在大肠杆菌BL21中表达

2、，目的蛋白分子量约为30kD，最佳诱导时间为4h，最佳IPTG诱导浓度为1．0mmol／L。关键词：PR一5蛋白GmOLPa蛋白基因克隆蛋白序列分析原核表达ProteinSequenceAnalysisandProkaryoticExpressionofGmOLPaGenefromSoybeanTianZhiruiHanHongWuZhihaiLiDongzheYangMeiying(JilinAgriculturalUniversity，Changchun130118)Abstract：InordertoidentifythefunctionofGmOLPagenefromsoyb

3、ean，totalRNAwasextractedfromtherootofsoybeaninducedbysaltstressandGmOLPagenefragmentwasobtainedbyRT—PCR．GmOLPaproteinsequencewasanalyzedandtheresultsshowedthatGmOLPaproteinbelongedtoPR一5ofGH64一TLP—SFhomologoussuperfamilyandwasthemostcloselygeneticrelationshipwiththePR-5fromtomato．The25—244amino

4、acidsintheGmOLPaproteinsequenceweretheconservativedomain．ProkaryoticexpressionvectorpET-28-GPofGmOLPagenewasconstructedandexpressiveconditionsofpET一28一GPinE．coltBL21wereoptimized．SDS—PAGEwasassayedandshowedthatrecombinantplasmidcouldbeinductedandexpressedinEcolt．Thetargetproteinmolecularweightw

5、asapproximately30kD，theoptimalinductiontimeof4handtheoptimalIPTGinductionconcentrationof1．0mmol／L．Keywords：PR一5proteinGmOLPaproteinGenecloningProteinsequenceanalysisProkaryotieexpression病程相关蛋白(pathogenesis．relatedprotein，PRP／的生理生化功能。大量研究表明，PR．5蛋白不仅能PRs)是指由寄主植物编码，在病理或病理相关的诱导真菌类的细胞程序性死亡(PCD)L5，保护

6、植环境下诱导产生的一类蛋白质¨JoPRs最早由Van物免受病害的侵染，还能通过诱导植物细胞的PCD，Loon和VanKammen于1970年在烟草花叶病毒增强植株整体对冻害的抵抗j。冬黑麦叶片的质外(TMV)诱发产生过敏性坏死反应的烟草叶片中检测体内分泌的PR．5蛋白在低温诱导下，与抗冻蛋白有到。之后，病程相关蛋白的研究报道日渐增多。已着同样的抗冻功效⋯。目前，已经从大麦、玉米、发现的病程相关蛋白被归类为17个家族J。番茄¨。。和小麦⋯等植物中发现了PR．5蛋白。PR．5蛋白是PRs蛋白家族中的一类，也被称为GmOLPa蛋白是大豆在盐诱导下所产生的一类类甜蛋白(thaumatin．1

7、ikeprotein，TLP)L4J~PR一5蛋蛋白，称为大豆类渗透蛋白，属于大豆PR一5家族。白包含了具有多种抗逆功能的渗调蛋白(osmotin)前人研究表明，该蛋白具有抗盐功能，为更好的在和类渗调蛋白(OLP)，可能使它在植物中具有不同蛋白水平上研究GmOLPa的功能。本试验从盐处理收稿日期：2012—02—29基金项目：国家自然科学基金项目(31171478)，吉林省自然科学基金项目(20101573)作者简介：田智蕊，女，硕士研究生，研究方向：植物