分子标记技术在中药鉴定中的应用

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1、2010年4月下第2卷第8期中国中医药咨讯Al2010Vn1．2No．8JournalofChinaTraditionalChineseMedicineInformation·243·分子标记技术在中药鉴定中的应用侯绍远山东枣庄市食品药品监督管理局山亭区分局山东枣庄277200中药鉴定学的任务是鉴定和研究中药的品种和质量，电泳，然后EB染色，观察它们电泳图谱的差异，或者离心寻找和扩大新药源Il】，我国中药资源极其丰富，但由于各种后转移到硝酸纤维素膜上，用探针进行杂交，再根据杂交区原因造成的大量宝贵资源的破坏已使部分

2、药用资源濒临绝带的不同来区分。罗志勇日等运用这一技术，成功地构建出迹；另外某些不法人员惟利是图，以假乱真，从而导致中药市多态性丰富和重复性好的人参、西洋参DNA指纹图谱，并运场的混乱，严重影响了药材的质量和药效的稳定。因此加强用计算机软件对结果进行二维图象处理，计算出不同样品间中药资源的调查、种质的鉴定研究和分类保护是当务之急，的相似度指数，并且从相似度指数发现西洋参与引种到我国是实现我国中药现代化的基本保障。吉林的西洋参的遗传物质基础——基因组DNA发生了随着现代自然科学技术的发展，许多新学科理论和实3RAPD和

3、AP—PCR标记验技术不断渗透到中药鉴定领域，近年来又涌现出了许多随机扩增多态性DNA(RAPD)，用合成的较短的单个新的方法。随机引物，以药材总DNA为模板，在DNA聚合酶作用下，随着分子遗传学和基因工程技术的不断发展和广泛应进行非特异性的聚合酶链式反应，分析扩增产物电泳图谱用，人们清楚地认识到，利用现代生物学技术构建的指纹图在不同类群中的变异，扩增片段具有品种、品系及单株特异谱具有高度种属和个体特异性，而且是绝大多数生物遗传性。任冰如等用RAPD技术对南、北苍术不同居群间的亲信息的载体，因而以其作为中药种属或个

4、体变异鉴别指标缘关系作了鉴定，从DNA水平上证实了南、北苍术亲缘关是一种可靠的鉴别手段。应当说，只有当中药材鉴别应用了系很近，差异很小，为后者的观点提供了有力的证据。分子遗传学技术，才能真正标志着中药鉴定进人了分子水曹晖等利用18—24个碱基的6种引物进行任意引物聚合平。目前，限制性片段长度多态性、聚合酶链反应已逐渐成酶链式反应(AP-PCR)用6个碱基的OP6—6引物进行为检测基因多态性的常规技术，而其中建立在技术基础上RAPD扩增，获得了菊科地胆草属2种植物地胆草、白花地的和一则是世纪年代发展起来的基因多态性分

5、析中行之有胆草和假地胆草属1种植物假地胆草以及4种商品苦地胆效的遗传标记技术。药材DNA指纹图谱，同时测算了其DNA指纹图谱的相似1DNA分子标记技术系数，据此可区别中药苦地胆及其混淆品白花地胆草和假在DNA分子水平，分子杂交(Molecularby2bridization)地胆革。和聚合酶链反应(Polymerasechainreaction，PCR)被称为检4PCR标记测基因多态性的两个核心DNA分子标记技术。前者主要有丁士友等利用PCR扩增技术和RFIP分析手段，对以低拷贝序列为探针的限制性片断长度多态性(R

6、estriction黄芪亚族7属9种和甘草亚族1属1种的亲缘关系进行了fragmentlengthpolymorphism，RFLP)和以重复序列为探针研究，认为该方法对研究植物的系统进化大有潜力，结果可的DNA指纹技术(DNAfingerprinting)，后者主要有随机扩信。吴平等对龟的线粒体12SrRNA基因片段进行扩增，然增的DNA多态性RandomLyamplifiedpolymorphicDNA，后测定扩增产物的序列。通过这种方法，他们构建了21种RAPD)、任意引物扩增的PCR(Arbitarilyp

7、rimedPCR。AP—龟类的12SrRNA基因片段序列数据库，成功地将乌龟与其PcR)、DNA测序技术(DNAsequencing)以及PCR和RFLP它混淆品种区分开来。王建云等对鸡内金线粒体Cytb进行相结合的扩增片断长度多态性(AmplifiedfragmentlengthPCR扩增反应，然后测序，将鸡内金与鸭内金区分了开来。polymorphism，AFLP)、PCR选择性限制酶谱技术(PCR—他们还用该法鉴定了鹿鞭与牛鞭、驴鞭。selectiverestriction，PCR—SR)等代表性DNA分子标

8、记技参考文献术。这些DNA分子标记方法各有优缺点，在中药分析应用[1】李家实主编．中药鉴定学．上海：．海科技出版社)1996：1中应根据材料、条件、目的来决定采用何种技术，选择原则【2】罗志勇，周钢，周肆清等．AFLP法构建人参、西洋参因宜以可靠性高、重现性好、简便易行为目的。DNA指纹图谱．药学学报，2000，35(8)：626．【3】任冰如，贺善安，於虹