dna分子标记技术在中药鉴定学中的应用

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1、万方数据黑龙江医药Heilon西i明gMedicineJoumalVoL25No．42012·545·DNA分子标记技术在中药鉴定学中的应用郭艳丽。鞠爱霞黑龙汪中医药大学(黑龙江哈尔滨150040)摘要DNA分子标记技术是近年来发展起来的一种新的分子生物学技术。本文介绍了几种DNA分子标记技术的基本原理和特点，概述了近年来该技术在药用植物鉴别中的应用进展。并展望了其应用前景。关键词：DNA分子标记技术；药用植物；鉴别中图分类号：R282．5文献标识码：A文章编号：1006—2882(2012)04—545一03ApplicationofDNAM01ecularMarkerTechnologyo

2、nIdentificationofMedicinalPlants觎oM．以以觇洳豫泐叼(眦删留D，c7l伽黜胁d搬能(№泐哪阮嘲日跏咖150040)A蜘ct：DNAmol∞ul盯mad【ert∞IlIlolo舒i8a他w魄lIIlokIgy0f哪I∞ularbiologyinlecentyea阻T)rpe8，b柏ic州n．ciple锄dch啪cteri8ti∞ofDNAmol∞IIlar删盯kert∞llIIolo盱we难俐ewdThentlle印汕c砒ionprog陀sBinidcntifi僦i佣0fmedicinalpl明协we陀expoundedFinaIly，tllepmBp∞tw鹏f

3、．o他caste也Key啪rds：DNAmol∞山rm&fl【凹t∞lIIIoIo科；M。dicinalPl明协；Iden娟c鲥硼传统中草药鉴定的方法主要有基源鉴定、显微鉴定、理化鉴定、生物鉴定等，然而这些鉴定几乎都是以生物体的遗传性表现型为鉴定目标，不仅受到遗传因素的影响，而且与生物体的生长发育阶段、环境条件、加工炮制等有着密切的关系，具有很大的变异性和随意性，难免存在主观性强、重复性和稳定性差等缺点，因此对鉴定结果的可靠性带来了一定的影响。近年来．随着分子生物学技术的发展，DNA分子标记技术应运而生，并且已经广泛应用于药用植物遗传多样性、系统学、分类学研究，并逐渐渗透到中草药的鉴定领域，推

4、动了中草药鉴定研究的发艘。DNA作为遗传信息的载体，信息含量大，在同种内具有高度的遗传稳定性．并且不受外界环境冈索和生物发育阶段及组织器官差异的影响，因此，用以DNA分子为基础的遗传标记进行中草约鉴别结果更为准确可靠，非常适用于近缘种、易混淆品种、珍稀品种等的植物鉴定。目前．用于中草药鉴定的分子标记技术主要有RFLP、RAPD、AFLP、lssR等，本文概述了国内外近年来分子标记技术在中草药鉴定中的应用与发展。1限制性片断长度多态性(R∞tricti佣Fra舯entL七ngthp01．舯orphi8m．RFLP)限制性片断长度多态性(Re8试ctionFmgTnentkngthPolymorp

5、hism，RFLP)。是最早发展的分子标记技术．其基本原凳l{足利用限制性内切酶酶切不同个体基冈组DHA后．与同位索或1E同位索探针标记进行杂交，从而检测与探针含同源顺序的酶切片段在长度上的差异。RFLP既可以检测基冈组DNA，也可以检测rDNA或u1．绿体DNA。结果较为稳定。为共显性表达，可以区分杂合体、纯合体，目前已被应用于植物遗传图谱构建及亲缘关系鉴定等方面。但在实际应用过程中，人们普遍感到经典的RFLP技术须经酶切、电泳、soutlIem转移、与探针杂交、放射自显影等步骤。实验操作不方便，费时费力，并受到探针来源的限制，多态性检出效率又低．同时要求的DNA量较大，实验材料必须额鲜，因

6、此难以适用于干燥药材的鉴定。目前在中药鉴定领域很少使用。已归为被淘汰的技术。2随机扩增片段长度多态性(R丑nd伽AmpliliedPolyn的r．PIIicDNA。RAPD)随机扩增片段长度多态性标记(R帅domAmpliIiedPdy·nⅪfphjcDNA，RAPD)，是一种以PcR技术为基础，可对整个未知序列基因组进行多态性分析的DNA分子标记技术。其基本原理足利用合成的随机引物(一般为8一lO个碱基)对基冈组DNA进行扩增．然后电泳检测PCR产物的多态性。RAPD具有广泛性和通用性，具有对DNA的质量要求较低、技术简便、检测迅速、灵敏度高、可操作性强等优点，可以检测出RFLP标记不能检测

7、到的重复顺序，适用于种质资源的鉴定和分类、遗传图谱的快速构建等研究，也可用于亲缘关系等的研究，在约用植物的鉴定研究方面具有独特优势⋯。其缺点主要在于它是一个最性标记，不能鉴别杂合子和纯合子。并且重复性差。相对于其他几种分子标记，队PD标记足在中药鉴定领域用得最多的，并对中药鉴定研究产生了深刻的影响。I认PD技术自问世以来，在‘lj约鉴定I{I主要用于中约混淆品、代用品的鉴定，多来源中药的鉴定．名责