曼地亚红豆杉愈伤组织诱导研究-论文.pdf

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1、0本刊重稿OSCIENCE&TECHNOLOGYINFORMATION2012年第5期曼地亚红豆杉愈伤组织诱导研究李真梅忠胡蕾(金华职业技术学院农业与生物工程学院浙江金华321007)【摘要】为研究曼地亚红豆杉愈伤组织的诱导最佳条件，以新生嫩茎为外植体筛选最佳的灭茵方案，以新生的幼茎和叶片为外植体筛选出诱导愈伤组织适宜的外植体和最佳的激素配比。结果表明：75％酒精处理30s+O．1％HgCl处理12min灭菌效果最好；幼茎比叶片更适合愈伤组织诱导，在MS基础上，最佳的幼茎愈伤组织诱导激素配比为0．3mg．LI。6一BA、1．0mg．L～NAA、

2、3．0mg．L～2,4-D，此时诱导率达到93．3％，愈伤组织生长质量好。【关键词】曼地亚红豆杉；愈伤组织；激素红豆杉是天然抗癌化合物紫杉醇的唯～来源．具有极高的医疗随着升汞处理时间的延长，死亡率逐渐提高．当延长至18min时，死亡价值．然而现存的红豆杉植物资源数量极为有限．且紫杉醇在红豆率达到了50．O％。愈伤组织诱导率随着处理时间延长提高，处理12杉植物中的含量极低，要获得1kg紫杉醇需要4000棵红豆杉树剥下min时最高．诱导率为83．3％．处理时间超过15min．诱导率又逐渐下10000kg的树皮。预计全世界每年需要紫杉醇至少1920—

3、4800kg左降培养基颜色在处理12min时基本无明显变化．而在处理16min和右。紫杉醇市场供求关系严重失衡。曼地亚红豆杉为二十世纪末引入18min时．培养基变红。综上所述O．1％升汞处理曼地亚红豆杉外植体我国的杂交品种．其紫杉醇含量高并且稳定[1】。因此，研究利用曼地亚12min是最合适的。红豆杉进行愈伤组织或细胞培养生产紫杉醇具有重大的应用价值和2．2不同外植体对愈伤组织诱导的影响良好的生态效应。本研究对曼地亚红豆杉愈伤组织诱导进行相关试曼地亚红豆杉的幼茎和叶均能诱导形成愈伤组织．但是茎形成愈验。探索曼地亚红豆杉愈伤组织诱导的最佳条件。为

4、进一步的研究奠伤组织的能力显著高于叶(见表2)。9种处理条件下。幼茎启动诱导时定基础间较叶片早．幼茎的出愈时间为l4—16天．而叶片的出愈时间为22—25天．可能是因为幼茎的组织分化程度低，细胞分裂更加旺盛。在基1材料与方法本培养基中0．3nag．L6-BA、1．0mg．L～NAA、3．0mg．L～2，4一D条件下，1．1材料幼茎的愈伤组织诱导率可达93．3％，显著高于叶的愈伤组织诱导率。在晴好天气，选取性状优良、无病虫害、生长健壮的曼地亚红豆杉同时．对愈伤组织的生长状况调查发现．幼茎诱导的愈伤组织生长状新生的嫩茎和叶片为外植体况要明显好于叶片

5、诱导的愈伤组织本研究说明幼茎更适合进行愈伤1．2方法组织的诱导1．2．1外植体最佳灭菌方案筛选表2不同激素配比对曼地亚红豆杉愈伤组织诱导的影响将嫩茎用洗衣粉澄清液浸泡15min．自来水冲洗30min．转至无处理，mg．L-出愈时间／d诱导率／％菌操作台，放人无菌烧杯先用75％的酒精消毒30s，无菌水清洗3次，6一BANAA2．4一D幼茎叶片幼茎叶片再用O．1％的HgC1消毒6—18min(见表1)，无菌水清洗8次．将茎切取长约1cm接种在培养基fMS+6一BA0．2mg．L一％NAA1．0mg．L十0．1O．51．0162566．736．72，

6、4一D2．0mg．L)，每处理接种30瓶，每瓶接种1个外植体。25c黑暗0．11．O2．O152460．026．7培养。接种22天后，统计诱导率、污染率、死亡率和培养基颜色变化情O．11．53．0152576．740．0况。外植体大部分变成深褐色或黑色者即判定为死亡．整个培养基变O．30．52．0142280．023_3红记为++++，外植体周围出现红色记为++，无明显变化记为一1．2．2不同激素配比对曼地亚红豆杉愈伤组织诱导的影响O_31．O3．O142393．346．7采用3因素3水平(3正交设计方案，3因素为6-BA、NAA、O．31．5

7、1．O152563_320O2，4一D，分别设置3个水平，详见表2。MS为愈伤组织诱导基本培养0．50．53．0152473-333．3基，其中蔗糖30g．L-1,琼脂8g．，pH调至5．8。每处理分别接种3O个幼茎和叶片，统计出愈时间，32d后统计愈伤组织诱导率。O．51．O1．O162556．716．70．51．52．0152583．336．72结果与分析2．1不同灭菌处理对灭菌效果的影响2．3不同激素配比对愈伤组织诱导的影响表1不同灭菌处理效果采用最佳的灭菌方案对幼茎进行消毒灭菌接种2周后．开始发生01％升汞愈伤组织．而叶片在接种3周后才

8、诱导出愈伤组织．不同激素组合对处理号处理时间／诱导率，％污染率／％死亡率／％培养基颜愈伤组织诱导有不同的影响(见表2)。当培养基中6-BA、NAA和2