DB37T 3420-2018 混合型饲料添加剂中雌二醇的测定高效液相色谱法.doc

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1、ICS 65.120B46     DB37山东省地方标准DB37/T3420—2018     混合型饲料添加剂中雌二醇的测定高效液相色谱法Determinationofestradiolinmixedfeedadditives—Highperformanceliquidchromatography2018-09-14发布2018-10-14实施山东省质量技术监督局   发布DB37/T3420—2018前  言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准主要起草单

2、位：山东省饲料质量检验所。本标准主要起草人：孙延军、张芸、张玮、门晓冬、李俊玲。4DB37/T3420—2018混合型饲料添加剂中雌二醇的测定高效液相色谱法1　范围本标准规定了混合型饲料添加剂中雌二醇含量的高效液相色谱测定方法。本标准适用于不含无机载体的混合型饲料添加剂〔以饲料原料稻壳粉、玉米皮、葡萄糖、玉米淀粉、玉米芯粉以及多种饲料原料混合物（包括稻壳粉、玉米皮、葡萄糖、玉米淀粉、玉米芯粉、桔梗、甘草、白术、赤药、知母、茯苓等混合）为载体〕中雌二醇的测定。本标准的检出限为0.5mg/kg，定量限为1.0mg/kg。2　规范性引用文件下列文件对于本文

3、件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备3　原理试样中雌二醇用乙腈溶液提取，经固相萃取柱净化后，上高效液相色谱仪测定，外标法定量。4　试剂或材料除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。4.1　乙腈:色谱纯。4.2　甲醇:色谱纯。4.3　雌二醇标准品：CAS号:50-28-2。雌二醇含量≥98.5%。4.4　5%甲醇溶液：准确量取5mL甲醇（

4、4.2），用水稀释至100mL。4.5　乙腈水溶液：乙腈+水=4+6,V+V。4.6　雌二醇标准贮备溶液：称取雌二醇标准品（4.3）10mg（精确至0.0001g），置于10mL容量瓶中，用甲醇（4.2）定容，配成浓度为1mg/mL的标准贮备溶液。2℃～8℃保存，有效期6个月。4.7　雌二醇标准工作溶液：准确移取雌二醇标准贮备溶液（4.6）1mL置于10mL容量瓶中，用甲醇（4.2）定容至刻度。该溶液雌二醇的浓度为100μg/mL。2℃～8℃保存，有效期3个月。4.8　雌二醇标准系列溶液：准确移取雌二醇标准工作溶液（4.7）适量，用乙腈水溶液（4.5

5、）稀释成浓度分别为0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL、5.00μg/mL、10.00μg/mL、20.00μg/mL的标准系列溶液。现用现配。4.9　固相萃取柱：HLB固相萃取柱（60mg/3mL），或其它等效柱。4.10　微孔滤膜：0.22μm，有机相。4DB37/T3420—20181　仪器设备1.1　高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器。1.2　分析天平：感量为0.001g和感量为0.0001g各1台。1.3　氮吹装置。1.4　离心机，转速不低于5000r/min。1.5　多管涡旋振荡器。1.6　固相萃取装置

6、。1.7　旋涡混合器。2　样品按GB/T20195制备试样，粉碎过0.45mm分析筛，充分混匀，装入磨口瓶中备用。3　试验步骤3.1　试样提取称取试样2g（精确至0.001g）于50mL离心管中，准确加入20mL乙腈（4.1），涡旋振荡20min后，在不低于5000r/min条件下离心5min，准确移取上清液5mL于10mL试管中，50℃下氮气吹至约2mL，加入4mL水，涡旋振荡以充分溶解残余物，为备用液。3.2　净化固相萃取柱（4.9），依次用3mL甲醇（4.2）、3mL水活化。全部备用液(7.1)过柱，依次用3mL水、3ml5%甲醇溶液（4.3）

7、淋洗，抽干或挤干。用5mL甲醇（4.2）洗脱，收集洗脱液，涡旋混匀，50℃下氮气吹干。准确加入乙腈水溶液（4.5）1mL，涡旋振荡以充分溶解，过0.22μm滤膜，为待测液。3.3　测定3.3.1　液相色谱参考条件a)色谱柱：C18，柱长150mm，内径4.6mm，粒径3.5μm，或性能相当者。b)柱温：40℃。c)波长：225nm。d)流动相：A为乙腈，B为水，梯度洗脱程序见表1。e)流速：1.0mL/min。f)进样量：20mL。表1　梯度洗脱程序序号时间，minA，%B，%10406024406034.190104DB37/T3420—2018表

8、1　梯度洗脱程序（续）序号时间，minA，%B，%47901057.1406061040601.1.1　定量