5-杂氮-2’脱氧胞苷对肝癌细胞中timp-3基因的作用

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1、一340一现代消化及介入诊疗2013年第18卷第6期ModemDigestion＆Intervention2013，Vo!No·6·论著·5一杂氮一2脱氧胞苷对肝癌细胞中TIMP一3基因的作用曾伟沈波聂玉强李爱民陈阮然【摘要】目的观察多株肝癌细胞中TIMP一3CpG岛的甲基化状况，观察甲基化药物5一杂氮一2脱氧胞苷对肝癌细胞株中TIMP一3基因表达及其CpG岛甲基化程度的影响。方法运用MSP定性检测8株肝癌细胞中TIMP一3CpG岛甲基化状况。使用去甲基化药物5一杂氮一2脱氧胞苷对甲基化阳性的细胞株进行干预

2、，观察干预组与对照组TIMP-3基因表达差异，并使用焦磷酸测序技术定量检测CpG岛甲基化差异。结果在8株肝癌细胞系中C3A、Hep一3B、HepG23株检测到TIMP一3CpG岛甲基化阳性。经去甲基化药物干预后，在这3株肝癌细胞中均发现TIMP一3mRNA的表达较对照组有明显上调(P<0．05)，CpG岛的甲基化率下降(P<0．05)。结论甲基转移酶抑制剂能显著降低肝癌细胞株TIMP一3CpG岛甲基化程度及上调TIMP一3mRNA的表达。【关键词】肝癌；TIMP一3；甲基化；5一杂氮一2脱氧胞苷Theefe

3、ctof5．．Aza—-CdRonTIMP——3geneinhepatocellularcarcinomaceHsZENGWei,SHENBo．NIEYu-qiang．LlAi—min，CHENRuan—ran．GuangzhouKeyLaboratoryofDigestiveDisease，DepartmentofGastroenterology，FirstMunicipalPeoplesHospitalofGuangzhou，GuangzhouMedicalUniversity，Guangzhou510

4、180,China【Abstract】ObjeetiveTheaimofthisstudyistoinvestigatetheCpGislandmethylationstatusofTIMP一3inHCCcelllines．totreatetheHCCcellsthatexhibitpositivemethylationwithDNAmethyltransferasein—hibitor(5-Aza-CdR)，andtoobservetheinfluenceof5一Aza—CdRontheexpressio

5、nofTIMP一3mRNAanditsCpGislandmethylationdegree．MethodsTIMP-3CpGmethylationstatusofHCCcellswereexaminedusingMSPassay．Methylation—positiveHCCcellsweretreatedwithDNAmethyltransferaseinhibitor(5-Aza—CdR)(interventiongroup)，andthedifferenceofTIMP-3mRNAexpression

6、wasobservedbetweeninterven—tiongroupandcontrolgroup．PyrosequencingmethodwasappliedtoquantitativelyexaminetheCpGislandmethylationpercentage．ResultsThemethylationofTIMP一3CpGislandsinC3A，HepG一2，andHep一3Bwaspositive．TheresultsshowedthatTIMP-3mRNAexpressionwasi

7、ncreased(尸<0．05)andthemethylationlevelwasdecreased(P<0．05)intheinterventiongroupcomparedtocontrolgroup．Conclusion5-Aza—CdRcouldremarkablyreducetheleveloftheCpGislandmethylationandincreasetheexpressionofTIMP-3mR—NAinHCCcells．【Keywords】HCC；TIMP-3；Methylation

8、；5-Aza一2'-deoxycytidineDNA的甲基化属于表观遗传学范畴．它对基因从而生成甲基化DNA。人类中DNA甲基化大多发表达的调控不依赖于基因序列改变，DNA甲基转移生于CpG二核苷酸的胞嘧啶上DNA甲基化通常通酶(DNAmethyltransferase，DNMTs)将甲基集团催过抑制转录因子与启动子结合【1J，改变染色质结构，化，转移到5'-CpG一3中胞嘧啶的第五位碳原子上。促进转录抑制子的结