脂肪源间充质干细胞治疗aGVHD分子机制的初步研究.doc

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1、脂肪源间充质干细胞治疗aGVHD分子机制的初步研究作者：房佰俊，宋永平，林德，曹莹’【关键词】间充质干细胞；TCR,V3基因；移植物抗宿主病；脂肪［摘要］目的：初步探讨成人脂肪源间充质干细胞(adultadiposetissuederivedmesenchymalstemcel1s,AMSC)治疗急性移植物抗宿主病(acutegraftversushostdisease,aGVHD)的分子机制。方法：3例行异基因造血干细胞移植术后发生aGVHD患者，以每公斤体重2X106个细胞剂量静脉输注AMSC；应用RTPCR扩增患者AMSC使用前后外

2、周血单个核细胞的TCRVB24个亚家族的CDR3,了解患者TCRVBT细胞的分布情况。结果：患者发生aGVHD时，有TCRV03及其他亚家族基因表达，输注AMSC后，GVHD得以有效控制，VB3不表达;当患者GVHD复发时，VB3基因又表达，治疗后不表达。结论：AMSC治疗aGVHD的分子机制可能与其抑制TCRVB亚家族基因表达有关，TCRVB3可能是AMSC作用的靶基因。［关键词］间充质干细胞；TCRVP基因；移植物抗宿主病;脂肪StudyontheMolecularMechanismofTreatmentwithAdultAdipos

3、eTissueDerivedMesenchymalStemCel1sonAcuteGraftVersusHostDiseaseAbstract:ObjectiveToinvestigatethemolecularmechanismoftreatmentwithadultadiposetissuederivedmesenchymalstemcel1s(AMSC)onacutegraftversushostdisease(aGVHD)patients.MethodsAdoseof2X106AMSCperkgoftheaGVHDpatients

4、'weightwasgivenintravenously.ThedistributionofTCRVBTrepertoirewasdeterminedwithamplificationoftheCDR3ofTCRVP24subfam订ygenesbyusingRTPCRin3caseswithGVHDfollowingallogeneichematopoieticstemcel1transplantation.ResultsItwasfoundthattheywereexpressionsofTCRVB3geneandothersubfa

5、milygeneswhenGVHDwasobvious,buttheywerenotdetectedafterAMSCtreatmentwithremissionofGVHD,whileduringrelapseoftheGVHD,expressionsofVP3genereappeared,butdisappearedaftertreatment・ConclusionThemolecularmechanismforthetreatmentwithAMSConGVHDmightbecorrelatedwiththeinhibitionof

6、TCRVBsubfamilygeneexpress!onsandtheTCRVP3genemightbethetargetgeneforAMSC.Keywords:Mesenchymalstemcell;TCRVBgene;GVHD;Adipose严重的急性移植物抗宿主病是接受异基因造血干细胞移植术后患者最主要的致死原因之一。2006年5月Ringden等的报道指出，骨髓间充质干细胞能有效控制常规免疫抑制疗法无效之严重aGVHD［1］。最近，我们从成人脂肪组织中分离出一免疫表型为F11U+CD31CD34的细胞亚群，体外实验证明其具有骨髓

7、间充质干细胞的全部特性［2］故将其定义为成人脂肪源间充质干细胞(adultadiposetissuederivedmesenchymalstemcel1s,AMSC)□本研究中，我们使用AMSC治疗3例aGVHD患者，获得良好疗效，并利用基因扫描技术分析了这3例患者在AMSC使用前后TCRVB基因的变化，初步探讨了间充质T细胞(mesenchymalstemcells,MSC)在体内控制aGVHD的分子机制。1材料与方法1.1AMSC的分离和培养［2］参照我们实验室已建立方法:抽取适量皮下脂肪组织，剪碎，用DHanks液洗去血细胞，0.2

8、%II型胶原酶消化2h,洗掉胶原酶，用FicollPaque(1.077g/ml)分离液分离得到单个核细胞后，用CD45及GlyA磁珠(MiltenyiBiotec)分别去除CD45+及Gly