彩鲫ran基因原核表达蛋白多克隆抗体的制备.pdf

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1、第36卷第2期淡水渔业2006年3月VoI.36No.2FreshwaterFisheriesMar.2006彩鲫ran基因原核表达蛋白多克隆抗体的制备李常健，蒋琼凤（湖南科技学院生命科学与化学工程系，湖南永州425006）摘要：采用SDS-PAGE分离纯化彩鲫（Carassiusauratusgibelio）ran基因编码区cDNA全长序列的原核表达蛋白，并以此为抗原免疫家兔，制备了相应的多克隆抗体；WesternbIotting结果表明，该抗体效价为lfl000，具有较高的特异性。并从抗原蛋白相对分子质量、每次注射蛋白量、注射方式、注射途径等诸方面对该技术的要点进行了介绍。关键词：彩鲫；r

2、an基因；原核表达蛋白；多克隆抗体中图分类号：S9l7；@959.403文献标识码：A文章编号：l000-6907-（2006）02-0003-03PreparationofMulticlonalAntibodyagainstExpressedProteinofColorCrucianCarpranGeneinE.coliLIChang-jian，JIANG@iong-feng（DepartmentofLifeSciencesandChemicalEngineering，HunanInstituteofScienceandEngineering，Yongzhou，China425006）Abs

3、tract：TheproteincodedbythefuII-IengthcDNAseguenceofrangenefromcoIorcruciancarp（Carassiusauratusgibelio）expressedinE.coliwasseparatedandpurifiedbySDS-PAGEinourstudy.Moreover，theexpressedproteinwasappIiedtoimmunizerabbitsandcorrespondingmuIticIonaIantibodywasprepared.WesternbIottingresuItsindicatedtha

4、tthepreparedantibodyhadthehightite（rlfl000）andhighspecificity.Moreover，thekeysofthistechnigueincIudingthereIativemoIecuIarmassofantigen，theguantityofproteinsineachinjection，procedureofinjection，andapproachesofinjectionwereaIsointroducedinthispaper.Keywords：cruciancarp（Carassiusauratusgibelio）；rangen

5、e；prokaryoticexpressionprotein；muIticIonaIantibody鱼类是脊椎动物中物种多样性最丰富的动物类l实验材料和方法群，因其具有许多优良特性而成为细胞和发育生物［l，2］学研究的良好模式动物。为了对鱼类基因的表1.1表达蛋白的分离纯化达特征及其功能进行深入研究，常需要首先对目的l.l.l菌体破碎基因编码区或其部分编码序列在大肠杆菌中进行原挑选表达目的基因的大肠杆菌菌体于LB固体核表达，然后以表达蛋白为抗原制备相应的单克隆培养基（加入l00!g/mLAmp）上划线，37C培养或多克隆抗体。其中多克隆抗体的制备方法简便，l6h后，挑取单个克隆到5mLLB液体

6、培养基（加［3~5］周期较短，在科研中应用广泛。本文以彩鲫入l00!g/mLAmp）中，摇床培养l0h至对数期，ran基因编码区cDNA全长序列原核表达蛋白多克然后加入终浓度为lmmoI/L的IPTG在37C诱导隆抗体的制备过程为例，就如何快速制备鱼类基因表达3~6h。未加IPTG诱导的菌液作为对照。原核表达蛋白的高效价、高特异性的多克隆抗体进取0.5mL菌液，离心去上清，用抽提液行介绍和讨论。（20mmoI/LTris-HCI，pH7.2，5mmoI/L"-磷收稿日期：2005-ll-28资助项目：湖南省自然科学基金项目（编号：05JJ40035）、湖南省高等学校科研经费（青年项目，编号：0

7、4B052）资助第一作者简介：李常健（l968-），男，湖南永州人，博士，副教授，主要从事鱼类遗传学研究及教学工作。E-maiI：Icjl9l9@l63.com4淡水渔业2006年酸甘油，1mmoI/LEGTA，1.5mmoI/LMgCI2，以样品稀释倍数，即为每mL该样品所含可溶性蛋50mmoI/LNaCI，1mmoI/LDTT，1!g/mLaprotinin，白质的量。1!g/mLIeupep