草莓不同组织RNA提取方法的改良研究.pdf

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1、第29卷第2期北京农学院学报Vo1．29，No．22014年4月JOURNALOFBEIJINGUNIVERSITYoFAGRICULTUREApr．，2O14草莓不同组织RNA提取方法的改良研究刘建，沈元月(农业应用新技术北京市重点实验室，北京农学院植物科学技术学院，北京102206)摘要：探讨一种适于草莓不同组织的RNA提取的改良方法。通过增加裂解液震荡强度、离心柱多次吸附、增加去蛋白液温育次数及漂洗次数等步骤对EASYspinRNA提取总RNA操作方法进行改进。结果表明，改良方法提取的草莓根、茎、叶、果实、花中的总RNA，电泳检测都出现清晰的28s和18s两条明显的条带，表明总RNA完整

2、性较好；紫外分光计分析其OD260／OD280值在1．88至2．O6之间，OD260／OD230值均大于2．0，RNA浓度含量为31O～500“g／mI，表明提取的总RNA纯度好、含量高；基于RNA中mRNA反转录的RT-PCR扩增Actin基因分析结果表明，改良方法提取的草莓不同组织的总RNA质量高。总之，经过电泳、紫外、反转录分析结果证实，改良EASYspin适于草莓果实等不同组织总RNA的提取，是草莓类似果树种类总RNA提取的首选借鉴方法。关键词：草莓；总RNA；果实；RNA提取；RT—PCR中图分类号：$668．4网络出版地址：http：／／www．cnki．net／kcms／deta

3、il／11．2156．S．20140507．2036．054．html文章编号：1002-3186(2014)02-0009-03文献标志码：Adoi：10．13473／cnki．issn．1002—3186．2O14．0049ImprovementofRNAextractionmethodfromstrawberrydifferenttissuesLIUJian，SHENYuan—yue(BeijingKeyLaboratoryofNewTechnologyinAgriculturalApplication，CollegeofPlantScienceandTechnology，Beijing

4、UniversityofAgriculture，Beijing102206，P．R．China)Abstract：ThisstudyexploresanimprovedmethodforRNAextractionfromstrawberrydifferenttissues．TheimprovedEASYspinmethodforRNAextractionincludesanincreaseinlysating—shockingstrength，pin—columnadsorbingtimes，remov—al—of-proteinsolutionincubationtimes，andeluti

5、ontimes．TheresultsshowedthattwodistinctelectroDh0resisbandsof28Sand18SwereincludedinthetotalRNAs．theywereextractedbytheimprovedEASYspinfromstrawberrydifferenttissuesofroot，stem，leave，fruitandflowers，whichindicatedtheintegrityoftotalRNAs；theOD260／OD280valuewith1．88—2．O6，0D260／OD23Ovalueswith2．0above，

6、andRNAconcentrationswith310—500ttg／mIshowedthehighpurityoftotalRNAsbyUVspectrometeranalysis．TheresultsbasedonRT—PCRanalysisusingActingeneshowedthehighqualitycDNAsofthetota1RNAs．Inconclusion，theresultsfromelectroDhoresis，UVspectrometer，andRT—PCRdemonstratedthattheimprovedEASYspinmethodsaresuitablefor

7、extractionoftotalRNAfromstrawberrydifferenttissues。andarealsopreferredRNAex—tractionmethodforothersimilarfruitcropstostrawberry．Keywords：strawberry；totalRNA，fruit，RNAextraction，RT—PCR草莓作为非呼吸跃变型果实的模式植物