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1、四川动物2009年第28卷第6期SichuanJournalofZoologyVol128No162009金属离子对牛小肠碱性磷酸酶的影响3张营,余同,赵欣平,高举(四川大学生命科学学院,生物资源与生态环境教育部重点实验室,成都610065)摘要:经Tris2HCl缓冲液抽提,硫酸铵分级分离沉淀,2次DEAE232柱层析和SephadexG2150凝胶过滤,从牛小肠中得到碱性磷酸酶(ALP),提纯倍数为50.69倍,比活为48.87U/mg,酶液经十二烷基硫酸钠2聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS2PAGE)检测呈现单一条带。该酶催化底物对硝基苯磷酸二钠(pNPP)水解
2、反应的最适pH值为9.7,最适温++度为45℃。研究了多种金属离子对牛小肠碱性磷酸酶活性的影响,结果表明:一价金属离子Na、K对酶活力没有2+2+2+2+影响;不同的二价金属离子对酶的影响不同,过渡态金属离子中,Ni、Co对酶的活力影响不大,Mg、Ca、2+2+2+2+2+Mn对酶有不同程度的激活作用,Zn、Cu对酶有抑制作用;重金属离子Pb、Cd对酶的活力起抑制作用。关键词:牛小肠;碱性磷酸酶;金属离子中图分类号:Q556文献标识码:A文章编号:1000-7083(2009)06-0835-04EffectsofMetalIonsonAlkalinePhosp
3、hataseofCalfIntestine3ZHANGYing,YUTong,ZHAOXin2ping,GAOJu(SchoolofLifeSciences,KeyLaboratoryofBio2resourcesandEco2environmentMinistryofEducation,SichuanUniversity,Chengdu610065,China)Abstract:Alkalinephosphatase(ALP,EC3·1·3·1)isanon2specificphosphomononoesterasethatfunctionsthroughth
4、ephosphosery1intermediatetoproduceafreegrouptootheralcohols.ALPshavebeenextensivelyinvestigatedandwidelyusedasbiochemicalanddiagnosticreagents,amongwhichALPfromcalfintestineisanidealoneforitsextensiveusesingeneticengineering.WechoosecalfintestineasaresourceofALPforthepurposeofapplyin
5、gALPtobiochemicalandclini2calreagents.CalfintestineALPwasseparatedbyextractionofn2butylalcohol,amonaniumsulfateprecipitation,ionex2changethroughDEAE232chromatographycolumn,gelfiltrationchromatographythroughSephadexG2150columnandDE2AE232chromatographycolumn.ALPwasdetectedasonebandthro
6、ughSDS2Polyacrylamidegelelectrophoresis,indicatingitshomogeneityincomponents.Theultimatespecificactivityofpurifiedenzymewasmeasuredas48.87U/mg.Studyofva2++2+2+riousmetalionsdemonstratesthatthepositivemonovalentcationsNa,Khadnoeffectontheenzymes;Ni,Cohad2+2+2+2+2+2+2+noobviouseffecton
7、theenzyme,Mg,Mn,CaactivatedtheenzymewhileZn,Cu,Pb,Cdinhibitedtheenzyme.Keywords:calfintestine;alkalinephosphatase;metalions碱性磷酸酶(Alkalinephosphatase,EC3·1·3十分昂贵,我们选择了碱性磷酸酶含量丰富且价格·1,ALP)是一类在碱性条件下具有较高催化活性、较低的牛小肠作为原材料进行分离纯化并研究了不能催化几乎所有磷酸单酯酶水解生成正磷酸和对应同的金属离子对酶的影响,以期为制备碱性磷酸酶醇、酚和糖等物质的一组非特异性
8、水解酶类(Fern2试剂
