一株蜡状芽孢杆菌α-淀粉酶产生菌株的分离鉴定及酶学性质研究

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1、2010NO．8·68·SerialNo．221ChinaBrewingResearchRepo~一株蜡状芽孢杆菌．淀粉酶产生菌株的分离鉴定及酶学性质研究刘洋，陈爱萍，朱小顺，鲁水龙，刘玉东，王龙，刘莉(湖州师范学院生命科学学院，浙江湖州313000)摘要：从土壤中筛选出一株淀粉酶分泌能力较强的菌株，通过形态学观察、生理生化试验、16srDNA测序分析等方法对该菌株进行了鉴定，并对其分泌的淀粉酶的酶学性质进行了研究。经鉴定该菌株为蜡状芽孢杆菌。酶学性质研究表明，该酶的最适温度为40℃，最适pH值为5．0～6．0，在40℃

2、保温20min，酶活力下降70％左右。ca酶的活性和热稳定性没有激活作用。非变性蛋白电泳和淀粉酶活性染色结果显示，该菌仪产生一种淀粉酶。通过高效液相色谱分析，该酶对可溶性淀粉的主要水解产物为糊精、寡聚糖和少量葡萄糖，表明该酶为0【一淀粉酶。关键词：蜡状芽孢杆菌；分离鉴定；一淀粉酶；酶学性质中图分类号：Q93—331文献标识码：A文章编号：0254—5071(2010)08—0068—04Isolationandidentificationofan0t．amylase-producingBacilusoefeu$strai

3、nandenzymaticcharacteristesofthe．amylaseLIUYang，CHENAiping，ZHUXiaoshun，LUShuilong，LIUYudong，WANGLong，LIULi(SchoolofLifeScience,HuzhouNormalInstitute,Huzhou313000,China)Abstract：Astrain，whichproduced仅一amylaseathighlevel，wasisolatedfromsoilandidentifiedasBacillusce

4、Feusbymorphological，physiologicalandbiochemicalcharacteristicsand16SrDNAanalysis．Theenzymaticpropertiesoftheamylasesecretedbythestrainwerestudied．TheoptimumtemperatureandpHwere400(2and5．0-6．0．respectively．Theactivityofamylasedecreasedabout70％whenitwastreatedat40℃

5、for20min．TheCa斗showednosignificantefectsonenzymeactivityandthermo—stability．AccordingtotheelectrophoretogramofnativePAGEandactivestaining．onlyoneamylasewasproducedbyBacilluscereus．WiththeanalysisofHighPerformanceLiquidChromatography(HPLC)，themainhydrolysatesofsol

6、ublestarchtreatedbytheamylaseweredex~n，oligosaccharidesandasmallquantityofglucose，whichindicatedthattheamylasewas—amylase．Keywords：Bacilluscereus；isolationandidentification；—amylase；enzymaticproperties淀粉酶(Amylase)是能水解淀粉转化成葡萄糖、麦芽1．1．1土壤样品糖及一些低聚糖的一类酶类的总称，广泛应用于酿酒、食采

7、集自浙江中味酿造公司排污管附近。品、医药、纺织、饲料等领域。淀粉酶按对淀粉水解方式不1．1．2主要试剂和仪器同可分为0【淀粉酶、B．淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和异淀粉酶4丙烯酰胺：过硫酸铵购自Sigma公司；Taq酶：购自类[1]。由于其具有重要的商业价值，人们一直在积极寻找能TaKaRa公司；PCR纯化试剂盒：购自axygen(爱思进)公产生该酶的新菌株或选育该酶的高产菌株。有数百种嗜司；其他试剂均为国产分析纯。PCR仪：购自德1~Eppen．热真菌和上千种细菌可以产生淀粉酶，仅芽孢杆菌属就有d0州投份公司；紫外分光光度计：

8、购自Beckman公司；恒温48个种能产生淀粉酶[3J。摇床：购自美国Therrno公司。引物：由上海英俊生物技术近年来虽然我国酶制剂工业蓬勃发展，但与国外相比，有限公司合成。我国还存在着淀粉酶剂型、品种和生产菌株太过单一等1．1．3培养基问题。筛选出能产生特定酶学性质的淀粉酶菌株具有重淀粉培养基和LB培养基【4】。