饲料中蜡状芽孢杆菌的分离与鉴定

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饲料中蜡状芽孢杆菌的分离与鉴定第27卷第4期2009年8月青海大学(自然科学版)JournalofQinghaiUniversity(NatureScience)Vo1.27No.4Aug.2009饲料中蜡状芽孢杆菌的分离与鉴定张红见,韩志辉,董启伟(青海大学农牧学院,青海西宁810016)摘要:从西宁市某饲料厂随机采集饲料样品7O份,进行蜡状芽孢杆菌的常规分离培养与鉴定.共检出阳性菌株3l株,检出率44.29%(31/70),31株分离株的生化试验结果与蜡状芽孢杆菌完全一致,且3l株分离株都具有营养要求低,生长速度快的特点.关键词:饲料;蜡状芽孢杆菌;分离鉴定中图分类号iQ93—331文献标识码:A文章编号:1006—8996(2009)04—0069—02IsolationandidentificationofBacilluscereusinfeedstuf1FZ姒NGHong—jian,HANzhi—hui,DoNGQi—wei(CollegeofAgricultureandAnimalHusbandry,QinghaiUniversity,Xining810016,China)Abstract:Bacilluscereusof70feedstuffsampleswereisolatedandidentifiedbymutineBacillusce.reusisolationandidentificationstechniqueforXiningXfoodstufffactory.eresultsshowedthat31postiwestrainswereexaminedandbiochemicalpropertiesofallstrainswereassameasthoseofBa. cilluscereus.positiveratewas44.29%(3l/70).A11thestrainshavecharacteristicsoflownutritionandquickgrowth.Keywords:feedstuff;Bacilluscereus;isolationisdation蜡状芽孢杆菌(Bacilluscereus)是一种广泛分布于土壤,水,空气,植物,饲料和各类食品的好气,中温,产芽孢的杆菌.据报道…,蜡状芽孢杆菌在食品样品检测时显示较高的阳性率.该菌常处于孢子和休眠状态下,极易污染食物;一般不致病,但有的菌株可引起食物中毒.最近研究表明,本菌在自然情况下可引起牛的乳房炎,骆驼的"脓疱病",犬和猪的腹泻等;在特定的条件下也可引起人的急性发作的呕吐综合征与其他食物引起的慢性腹泻综合征J.由于蜡状芽孢杆菌污染的饲料和各类食品大多数感官性状正常,往往易被人们所忽略,因此,及时了解蜡状芽孢杆菌的分布状况则显得尤为重要.为此,我们于2005年12月—2oo6年5月对从西宁市某饲料厂采集的7O份饲料样品进行了常规分离培养与鉴定,现将结果报告如下.1材料与方法1.1材料1.1.1样品随机采集西宁市某饲料厂饲料70份.1.1.2培养基普通营养肉汤培养基,普通琼脂培养基,鲜血琼脂平板,酚红葡萄糖肉汤培养基,半固体培养基及各种生化培养基,均由青海大学农牧学院动物医学系传染病实验室自制.1.2方法1.2.1分离培养无菌称取饲料25g后置于灭菌研钵中研磨,加于225mL灭菌营养肉汤培养基,置37℃温箱培养18～24h后勾取液体培养物分别接种于普通琼脂平板和鲜血琼脂平板上,置37~C温箱培 养l8—24h.收稿日期:2009—04—20作者简介:张红见(197O一),男,河南新乡人,副教授.70青海大学第27卷1.2.2涂片,染色及镜检挑取疑似菌落涂片,作革兰氏染色并镜检.1.2.3细菌纯化及移植勾取少许疑似菌落接种于鲜血琼脂平板进行纯化培养,纯化后无菌移植到鲜血琼脂斜面上,37℃温箱培养18—24h后置4℃冰箱备用.1.2.4酚红葡萄糖肉汤厌氧发酵勾取少许疑似菌落接种于酚红葡萄糖肉汤培养基中,置37~C温箱厌氧培养24～48h,观察结果.1.2.5生化试验将获得的疑似目的菌株分别接种于葡萄糖培养基,乳糖培养基,麦芽糖培养基,甘露醇培养基,蔗糖培养基,硫化氢培养基,枸橼酸盐还原培养基,V—P培养基,1VIR培养基,吲哚培养基,尿素培养基,硝酸盐培养基,三糖铁培养基,半固体培养基,37~C下培养24h,观察试验结果.2结果2.1染色,涂片及镜检分离株为革兰氏阳性的大杆菌,菌体两端平整,多数呈链状排列,芽孢呈椭圆形,位于菌体中央,不突出菌体.2.2细菌形态及培养特性在普通琼脂培养基上菌落呈白蜡状,不透明,边缘不整齐,大小为3—4mm,血液平板培养基上菌落呈浅灰色,似毛玻璃,完全溶血(B溶血),边缘不整齐的菌落.在营养肉汤培养基中呈浑浊生长,形成菌膜或菌环.2.3酚红葡萄糖肉汤厌氧发酵酚红葡萄糖肉汤变黄,为阳性.2.4生化试验生化试验结果见表1,根据分离株的形态特征,培养性能和生化试验结果,表明分离株 是蜡状芽孢杆菌.表1分离株的生化试验结果注:+表示产酸或阳性;一表示不产酸或阴性;TSI反应模式=A表示产酸,培养基变黄;K表示不产酸,培养基仍为红色;其中+表示产生HS或气体.3讨论(1)饲料中蜡状芽孢杆菌的污染情况.对7O份饲料样品进行蜡状芽孢杆菌分离,共检出阳性菌株3l株,检出率为44.29%(31/70),表明此次采集的饲料样品中蜡状芽孢杆菌的污染率较高,应该引起该厂相关领导和有关部门的注意.由于该菌能够以孢子形式存在,且具有耐高温(100oC),耐酸碱,耐挤压和耐受颗粒饲料加工的影响等特点,因此在饲料中可长期存在.一旦有致病菌株污染饲料,其孢子进入肠道后,便能迅速在肠道上部复活(复活率接近100%),对畜禽的健康构成潜在威胁.(2)预防上的建议.目前,饲料的安全是国内外日益关注的问题,我国也相应制定了许多法律,法规和行业标准来规范饲料和添加剂的生产.对致病性蜡状芽孢杆菌污染饲料,应从以下几个方面进行预防:①严格控制饲料来源.由于蜡状芽孢杆菌广泛分布于土壤,水,空气,植物,饲料和各类食品中.原料应清洗,晾晒,收购和运输时尽量避免二次污染.②工厂环境监测与控制.在车间加工的环境中,其空气也含有蜡状芽胞杆菌,对车间加强空气环境检测和控制,车间在班后应开臭氧机,进行臭氧杀菌;改善车间布局,减少与外界空气的对流.③提高饲料调制器蒸汽压和延长饲料在其内滞留的时间.由 于该菌常处于孢子和休眠状态,选用5kg/cm蒸汽压和将饲料滞留时间从传统的7～15s延长到1—3rain,可加大对该菌的杀灭率.④蜡状芽孢杆菌作为一种食源性疾病的报道较多,在各种食品中的检出率也较高….在我国引起的食物中毒食品常与米饭,糕点等淀粉类食品有关.欧美一些国家,大多由甜点心,肉饼,色拉和乳类食品引起.蜡状芽孢杆菌引起的食物中毒食品大多无腐败变质现象,在组织和感官鉴定时,除米饭有时微发粘或入口不爽外,大多数食品均表现为完全正常的感官性状,这点应该引起食品加工人员的注意.(下转第88页)88青海大学第27卷3结论综上所述,采用傅立叶变换红外光谱法再结合二阶导数普图,根据巧克力中脂肪,蛋白质,糖等主要成分的特征吸收峰,可以对巧克力中组分及含量进行整体的定性及相对含量的分析,而且相对于以前如感官鉴别法,差示扫描量热法(DSC),高分辨色谱法,DS一电泳法等方法只能鉴别巧克力中一种或几种成分采用的方法简单,快速,准确.参考文献:[1]邓月娥,周群,孙素琴.丌1R光谱法与奶粉的品质分析[J].光谱学与光谱分析,2005,25(12):1972.[2]徐荣,孙素琴,刘友刚,等.四倍体金银花新品种的红外光谱分析[J].安徽农业科学,2009,37(12):5477.[3]谢晶曦,常俊标,王绪明.红外光谱在有机化学和药物化学中的应用[M].北京:科学出版社,2001.[4]孙素琴,周群,梁曦云,等.七种花旗参茶包的FnR光谱法无损鉴别[J].光谱学与光谱分析,2002,22(4):600.(责任编辑杨君丽) (上接第7O页)参考文献:[1]孟昭赫.食品卫生检验方法注解[M].北京:人民卫生出版社,1990.408—412.[2]董永胜,许军.甜高粱秸秆固态发酵生产燃料乙醇的工艺研究[J].酿酒,2007,34(4):49—51.[3]杨佐毅,李理,刘冬梅,等.自腐乳中蜡状芽孢杆菌的分离与鉴定[J].中国酿造,2008(17):39—47.[4]魏建功,王梅岩,蔡妙英,等.蜡状芽孢杆菌对骆驼的致病性的研究fJ].中国兽医杂志,1990,16(4):10—11.[5]BBIIntemationa1.StatusoflargescaleproductionanduseoffuelethanolininBrazil[C].Beijing:WorldFuelEthanolCongress,2001[6]黄丽彬,陈有容,齐凤,等.兰蜡状芽孢杆菌在饲料中的应用[J].粮食与饲料工业,2001(9):32—33.(责任编辑李渝珍)