一种豇豆重花叶病毒ic-rt real-time pcr检测方法的建立

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1、浙江大学学报(农业与生命科学版)36(5)：491～496，2010JournalofZhejiangUniversity(Agric．&LifeSci．)文章编号：10089209(2010)05—0491—06DOI：10．3785／j．issn．1008—9209．201005．003一种豇豆重花叶病毒IC—RTreal—timePCR检测方法的建立李彬，粟寒，吴翠萍，周明华，安榆林(江苏出入境检验检疫局，江苏南京210001)摘要：为建立豇豆重花叶病毒(Cowpeaseveremosaicvirus，CPSMV)免疫捕获一反转录实时荧光(Ic—RTreal—ti

2、me)PCR分子检测方法，利用从ATCC和DSMZ引进的CPSMV标准毒株，先建立CPSMVRTreal—timePCR检测方法；在此基础上，建立用于CPSMV检测的IC—RTreal—timePCR方法结果表明：IC—RTreal—timePeR方法的灵敏度可达500Pg叶组织；该方法具有特异性好、灵敏度高、操作简便等优点，省去了RNA的提取过程，适用于豇豆等豆类种子及种苗中对豇豆重花叶病毒的快速检测．关键词：豇豆重花叶病毒免疫捕获反转录；实时荧光PCR中图分类号：S4l一31；S643．4Q93—332文献标志码：ALIBin，SUHan，WUCui—ping，ZH

3、OUMing—hua，ANYu—lin(JiangsuEntry～ExitInspectionandQuarantineBureau，Nanjing210001，China)DevelopmentofIC—RTreal—timePeRmethodfordetectionofCowpeaseveremosaicvirus．JournalofZhejiangUniversity(Agric．&LifeSci．)，2010，36(5)：491-496Abstract：Amethodofimmuno—capturereversetranscriptreal—time(IC—RT

4、real—time)PCRassaywasdevelopedfordetectionofCowpeaseveremosaicvirus(CPSMV)．ByintroducingstandardCPSMVstrainsfromATCCandDSMZasmaterials，RTreal—timePCRmethodwasconstitutedfirstly，whichshowedgoodamplificationreactionandspecificity．BasedontheRTreal—timePCR，ICRTreal—timePeRdetectionmethodforC

5、PSMVwassetup．Thesensitivityoftheassaycouldreach500Pgleaftissues．Meanwhile，theIC—RTreal—timePeRassaywascharacteristicofgoodspecificity，highsensitivity，convenientoperation，andavoidedRNAextraction，whichwassuitableforrapiddetectionofCPSMVfromlegumeseedsandseedlingssuchascowpea．Keywords：Cowpe

6、aseveremosaicvirus；immuno—capturereversetranscript；realtimePCR豇豆重花叶病毒(Cowpeaseveremosaic株枯死；在田间对豇豆的侵染率可达100，产virus，CPSMV)属于豇豆花叶病毒科量损失可达5O％~2-43．(Comoviridae)、豇豆花叶病毒属(Comovirus)目前CPSMV主要分布在美洲地区，如美的确定种¨1J．该病毒的自然寄主为豆科植物，可国、巴西、秘鲁、委内瑞拉、特立尼达、波多黎各、严重侵染豇豆、大豆等多种作物．该病毒侵染豇哥斯达黎加和苏里南等国家[5]，中国尚无发生豆后，可

7、造成叶片花叶和斑驳，严重的可导致整与危害报道．CPSMV可通过种子进行远距离收稿日期：2009—12-15基金项目：江苏出入境检验检疫局科研项目(2006KJ35)作者简介：李彬(1972)，男，江西景德镇人，高级农艺师，从事植物检疫研究．E—mail：libin@iseiq．govcn浙江大学学报(农业与生命科学版)第36卷传播，其中豇豆的种传率为10，长豇豆(CPSMVR)，条件为42℃反应60min．(Wignasesquipedalis)的种传率为8；在田1．2．2免疫捕捉PCR管的制备免疫捕捉问，该病毒还可以通过菜豆叶甲(Cer