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《一株乳酸菌所产胞外多糖对荷瘤小鼠机体免疫功能影响的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、43卷 2期微生物学报Vol.43No.22003年4月ActaMicrobiologicaSinicaApril2003一株乳酸菌所产胞外多糖对荷瘤小鼠机体免疫功能影响的研究3顾笑梅 孔 健 王富生 马桂荣(山东大学微生物技术国家重点实验室 济南250100)摘 要:对一株产胞外多糖(Exopolysaccharide,简称EPS)的乳酸菌Z222菌株的培养条件进行了优化,其发酵液通过浓缩、除蛋白、脱色、乙醇沉淀、透析、CM2纤维素柱、DEAE2Sephadex离子交换柱和SephadexG2100凝胶柱
2、层析,冷冻干燥后得到一种纤维状白色固体产品EPSⅠ。将该产品对荷肉瘤S180小鼠进行机体免疫功能影响的初步试验,统计学处理结果表明,它对迟发型超敏反应、免疫器官重量和脾细胞抗体形成均有较为明显的影响。EPSⅠ有希望作为一种新的免疫调节剂。关键词:乳酸菌,胞外多糖,条件优化,免疫功能中图分类号:Q93919 文献标识码:A 文章编号:100626179(2003)0220251206乳酸菌(LAB)除被用于食品、饲料、工业乳酸等方面外,在医药工业上也有相当重要的作用,有的已被开发成保健品和药品加以利用,在
3、微生态学中具有重要的地位。LAB的[1]广泛应用促使人们对它进行更加深入的研究。最近,欧美及日本一些学者对LAB的大量研究表明,LAB在抗变异原性、防癌抗癌和增强机体免疫力方面有着不可低估的作[2,3]用。乳酸菌胞外多糖(EPS)即是这类细菌在生长代谢过程中分泌到细胞壁外的粘液多糖或荚膜多糖。仔细分析乳酸菌的生理功能均会发现与多糖有关。因为多糖类化合物广泛存在于动物、植物和微生物中,作为生命物质的组成成分之一,它们广泛参与了细胞的各种生命现象及生理过程的调节,但由于其结构十分复杂,并且其生物活性与其空间结构
4、、分子量大小、分支度和溶解度有关,所以迄今人们对其功能还未认识清楚。但是,不断积累的证据表明,多糖及其缀合物既是通讯的信息分子,如抗原决定簇、受体分子上的接受者(激素受体、毒素受体)以及生物活性物质有关的信息携带者等;又是细胞间的识别分[1,4]子,如性细胞粘着,病原体与寄主的作用、固氮菌的共生等;同时,大量药理及临床研究表明,多糖类化合物是一种免疫调节剂,能激活免疫受体,提高机体的免疫功能,在用于癌[5,6]症的辅助治疗中,具有毒副作用小,安全性高,抑瘤效果好等优点。但有关乳酸菌产胞外多糖对机体免疫功能的
5、影响研究国内尚未见报道。本文对乳酸菌Z222产胞外多糖的发酵条件进行了优化,从其发酵液中分离得到了多糖EPSⅠ,并将EPSⅠ用于治疗荷肉瘤S180小鼠,可增强免疫功能下降的荷肉瘤小鼠的免3通讯作者。E2mail:grma@beelink.com作者简介:顾笑梅(1970-),女,安徽寿县人,山东大学博士研究生,主要从事微生物活性物质方面的研究。E2mail:gxmyxc@1631com收稿日期:2002206213,修回日期:2002210224252微 生 物 学 报43卷 疫功能等结果进行初步报
6、道。1 材料和方法111 菌株和动物Z222菌株为本实验室保藏;昆明系小鼠,BalbPc小鼠,豚鼠。112 培养基MRS培养基配方见参考文献[7];条件试验在基本培养基中加入不同种类及不同浓度的糖。113 试剂和仪器CM2纤维素(Watman进口,上海化学试剂站分装),DEAE2SephadexA225(Pharmacia进口,上海化学试剂站分装),SephadexG2100(Pharmacia),S180肿瘤(山东省医科院提供),环磷酰胺(江苏恒瑞医药公司);Alsever液(自制),Gey氏液(自制),
7、Gey氏溶血明胶液(自制),722光栅分光光度计,旋转蒸发仪,SpectraMAX190微板光谱仪,冷冻干燥机(LABCONCO)。114 产EPSⅠ培养条件优化将活化的Z222菌株按1%接种量加入MRS液体培养基中,培养72h,间隔一定时间取样,离心除菌体后测定单糖和多糖含量变化;在基本培养基中加入不同种类的糖及不同浓度的糖,分别接种Z222培养27h后,6000rPmin离心除去菌体测定发酵液中含糖量的变[8,9]化。测定方法采用DNS法和苯酚2硫酸法。115 多糖的分离提取将Z222菌接入2LMRS液
8、体培养基中,培养24h后,6000rPmin离心去除菌体,收集上清液。向菌体中加入无菌水并置50℃水浴2h。浸提两次离心后弃去菌泥合并上清液,减压浓缩至适当体积。用蒸馏水透析48h,检测透析液中无单糖存在。再次浓缩。然后三[4,10,11]氯乙酸除蛋白、20%H2O2脱色、乙醇沉淀、透析、浓缩、真空干燥。粗品EPS溶于适量蒸馏水中,先后经CM2纤维素柱、DEAE2Sephadex离子交换柱和SephadexG21
