大豆球蛋白的组成多肽分离及氨基酸组分分析

《大豆球蛋白的组成多肽分离及氨基酸组分分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、食品与发酵工业FOODANDFERMENTATIONINDUSTRIES3大豆球蛋白的组成多肽分离及氨基酸组分分析郑志雄,杨晓泉(华南理工大学轻工与食品学院食物蛋白工程研究中心,广东广州,510640)摘要通过Nagano方法制备得纯度达95%以上的大豆球蛋白,以其为原料,通过制备型液相色谱,对大豆球蛋白的组成多肽进行了分离。结果显示:以DEAE2SepharoseFastFlow为分离介质,以含有6mol/L碳酰二胺和0102mol/L巯基乙醇、pH值为6145的0105mol/L磷酸缓冲液为平衡液,通过对穿透液及梯度洗脱液的分部收集

2、,大豆球蛋白的组成多肽能得到较好的分离,回收率达到75%,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示各组分的纯度达90%。此外,对各组成多肽的氨基酸组分及种类进行了分析。关键词大豆球蛋白,多肽,分离,制备型液相色谱,氨基酸组分分析大豆中蛋白质含量约为40%,根据沉降系数来1材料和方法分,大豆蛋白可分为2S,7S,11S,15S4个部分。其中7S和11S占大豆蛋白总量的70%以上。7S常称为111材料[1]大豆伴球蛋白,11S称为大豆球蛋白。低变性脱脂大豆片(白豆片),由山东新嘉华有大豆球蛋白通常是分子质量约35万u的六聚限公司提供。白豆片粉碎后,过80目筛

3、并储存于体,由5个亚基(A1aB2,A1bB1b,A2B1a,A3B4和4℃下密闭容器中。豆粉蛋白质含量为(5515±A5A4B3)组成,每个亚基由一条317-412万u的酸014)%,氮溶指数8410%。树脂(DEAE2sepharose性肽(pI<7的多肽链,简称A,包括A1a,A1b,A2,A3,fastflow)和柱子(415cm×30cm),购自美国GE公A4和A5)和一条约2万Da的碱性肽(pI>7的多肽司。试剂为分析纯或更高级别。链,简称B,包括B1a,B1b,B2,B3和B4)通过一个二硫112仪器键连接[2]。前人已将

4、5个亚基进行了分离、纯化[3]凝胶成像系统(White/UltravioletTranIllumina2[4]tor),美国UVP公司;AKTA蛋白质纯化仪,美国GE并对氨基端氨基酸序列进行了表征。国外科学家公司;垂直板电泳仪(PYCZ230),北京六一仪器厂。对组成上述5个亚基的酸性肽和碱性肽的分离方法[5-6]113方法进行了许多研究,如Liu等采用在大豆球蛋白溶[7]11311大豆球蛋白的制备液中加入巯基乙醇然后加热的方法;Kella采用先[10]采用Nagano法。将脱脂大豆粉按料水比1∶用巯基乙醇打开二硫键,然后利用离子交换填

5、料对其15(g∶mL)分散,调pH至715于室温下搅拌浸提2h,组成多肽进行选择性静态吸附的方法。不难发现,以然后8500r/min转速下离心20min,取上清液,加入上研究者分离得到的是酸性肽、碱性肽的混合物。[4,8-9]亚硫酸氢钠,浓度为0198g/L,调pH至614,4℃冷沉Moreira等利用离子交换色谱分离方法对酸性10h以上,在4℃、1000r/min离心20min,沉淀物即肽和碱性肽进行了分离,但是制备量太少,从而限制为大豆球蛋白。了对其理化性质及功能特性的研究。[9,11-12]11312大豆球蛋白组成多肽的分离纯化本

6、研究通过对大豆球蛋白的组成多肽制备量小利用DEAE2sepharoseFastFlow对大豆球蛋白中问题的解决,为后期科学研究提供足够量的原料。同的多肽进行分离纯化。10g大豆球蛋白溶于90mL时对其氨基酸组分进行了分析,为相关研究提供理论含有610mol/L碳酰二胺(尿素)和0102mol/L巯基参考。乙醇、pH值为6145的0105mol/L磷酸缓冲液中,即第一作者:硕士(杨晓泉教授为通讯作者)。为样品溶液,上样速度为1mL/min。采用氯化钠溶3国家自然科学基金项目(20776050);广东省自然科学基金项目液为梯度洗脱液,其线性

7、梯度浓度为0-0135mol/L,(07006508);教育部高校博士点基金(20070561059)收稿日期:2009-05-25,改回日期:2009-09-03流速为5mL/min。根据洗脱液的280nm吸光值所体现的洗脱峰分别自动收集相应组分并于去离子水1442009Vol135No111(Total263)分离与提取中4℃透析36h,中间换水4次,然后真空冷冻干燥使的洗脱图谱(见图2)。在洗脱图中,可观察到6个主[8-9]用。峰(分别标记为1、2、3、4、5、6)。与Mori等研究11313十二烷基钠2聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS

8、2结果比较,本试验的洗脱峰数量多1个,即最后那个PAGE)小峰(标记为Unknown),此外第1个峰和第2个峰的[13]SDS2PAGE电泳采用Laemmli的方法,选择分分离效果不如Mori等人的,这可能