虫草菌丝粉粗多糖含量测定方法探究.doc

《虫草菌丝粉粗多糖含量测定方法探究.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、虫草菌丝粉粗多糖含量测定方法探究虫草多糖是虫草体内含量最丰富、最重要的生物活性物质之一，虫草多糖是由甘露糖、虫草素、腺昔、半乳糖、阿拉伯糖、木糖精、葡萄糖、岩藻糖组成的多聚糖。本文从以下几个方面对虫草多糖测定方法进行了粗浅的摸索：超声提取与沸水浴提取的比较；沸水浴时间不同对粗多糖提取得率的影响；不同浓度的乙醇沉淀粗多糖对多糖得率的影响；醇沉不同时间对粗多糖得率的影响。现将实验结果总结如下：1材料和方法1.1材料虫草菌丝粉，购自西安双德生物有限公司。1.2试剂葡萄糖（中国食品药品检定研究院）、乙醇、硫酸（固安新欣化工有限公司）、苯酚（天津大学科威公司）。1.3仪器超声波

2、清洗器、恒温水浴锅、岛津UV2550紫外分光光度计、离心机。1.4供试品溶液的制备取虫草菌丝粉约l.Og,精密称定，置lOOmL量瓶中，加水80mL,超声或10CTC热水浸提，加水定容至100mL,过滤后收集滤液，取滤液5niL，加4倍体积的乙醇，41静置，离心收集沉淀，准确加入25mL水溶解沉淀。1.5粗多糖的测定”“苯酚硫酸法[3]1.5.1标准曲线的制备精密吸取浓度为0.lmg/mL的葡萄糖标准溶液0、0.20、0.40.0.60.0.80.l.OmL,分别置于10mL具塞试管中,各加蒸馆水使体积为1.OmL,再加苯酚溶液(5%)l.OmL,摇匀,迅速滴加浓硫酸

3、5.OmL,振荡摇匀后置沸水浴中加热15min,取出具塞试管，迅速冷却至室温，在490nm波长处测定吸光度。同时以蒸馆水如上法配制空白液。以葡萄糖标准液中葡萄糖的绝对质量为横坐标，以吸光度为纵坐标，用加权最小二乘法进行回归运算，求得直线回归方程。1.5.2样品溶液测定吸取按1.4方法制备的供试品溶液适量，置于10mL具塞试管中，按1.5.1法自“各加蒸馆水使体积为l.OmL,&hellip；&hellip；”至u&hellip；&hellip；在490nm波长处测定吸光度”操作，测定供试品溶液吸光度，根据标准曲线所确定的回归方程,计算供试品溶液中粗多糖的含量。2结果2

4、.1超声不同时间对粗多糖提取率的影响取虫草菌丝粉约l.Og,精密称定，置lOOniL量瓶中，加水80mL,超声20min>40min>60min>90min后过滤，滤液加4倍无水乙醇，4。（3静置6h后，离心收集沉淀，准确加入25mL水溶解沉淀。采用苯酚硫酸法分别测定粗多糖含量（结果如表l）o从表1可知，超声60min,所提取的粗多糖含量达到最大值，随着超声时间的延长，含量增加幅度不大，并且有减小的趋势。原因可能是由于超声波具有较强的机械剪切作用，长时间的作用会使大分子的多糖断裂，从而影响多糖得率［4］。故采用超声提取粗多糖时，超声时间选择在60min为宜。2.210

5、0°C热水浸提不同时间对粗多糖提取率的影响取虫草菌丝粉约l.Og,精密称定，置lOOniL量瓶中，加水80mL,100°C热水中浸提lh、2h、3h、5h、8h,滤液加4倍无水乙醇，静置6h后，离心收集沉淀，准确加入25mL水溶解沉淀。采用苯酚硫酸法分别测定粗多糖含量（结果见表2）从上图可知，热水浸提5h,粗多糖得率达到最大值，随着水浴时间的延长，得率增加缓慢，故从节省检测时间及节约能源角度考虑，采用水浴浸提，时间应控制在5h左右为宜。2.3醇沉不同时间对粗多糖提取率的影响取虫草菌丝粉约l.Og,精密称定，置100mL量瓶中,100°C热水中浸提5h后，滤液加4倍无水

6、乙醇，4工静置2h、4h、6h、8h、12h后，离心收集沉淀，准确加入25mL水溶解沉淀。采用苯酚硫酸法分别测定粗多糖含量（结果见表3）。从上图可知，随着沉淀时间的延长，粗多糖的得率增加,无水乙醇沉淀6h后，得率增加缓慢，故乙醇沉淀时间选择在6h为宜。2.4醇沉浓度对粗多糖提取率的影响取虫草菌丝粉约l.Og,精密称定，置100mL量瓶中,100°C热水中浸提5h后，滤液加4倍体积的浓度分别为60%、85%、95%、100%乙醇，4°C静置6h后，离心收集沉淀，准确加入25mL水溶解沉淀。采用苯酚硫酸法分别测定粗多糖含量（结果如表4）。从表4可知，乙醇浓度在100%,粗

7、多糖得率最高，随着乙醇浓度的减少，得率下降。故醇沉浓度应选择在100%为最佳。2.5显色稳定性取虫草菌丝粉约l.Og,精密称定，置100mL量瓶中,100°C热水中浸提5h后，滤液加4倍无水乙醇，41静置6h后，离心收集沉淀，准确加入25mL水溶解沉淀。采用苯酚硫酸法，加入规定量苯酚、硫酸显色，每隔30min测定吸光度。结果见下表：从表5可知，供试品溶液加入规定量的苯酚、硫酸显色后，在2h内测定，粗多糖含量结果较为稳定。3结论由上述实验结果可知，在进行虫草菌丝体粗多糖提取时，超声提取虽然较沸水浴提取节省时间，但前者粗多糖得率比后者低很多，故沸水浴提取