桂花多糖提取和含量测定方法探究

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1、桂花多糖提取和含量测定方法探究　　摘要：目的：利用溶剂法从桂花中提取出多糖，并对其含量进行测定。方法：使用乙醇对桂花进行脱脂处理，继用热水提取，醇析后得粗多糖，使用三氯乙酸除去蛋白质得精制多糖。利用多糖类化学成分在硫酸作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，后者和苯酚缩合成有色化合物的特性，以葡萄糖作为标准品，采用苯酚-硫酸法，在紫外分光光度计490nm处其测定吸光度，绘制标准曲线。取适量精制多糖，按测定标准曲线同样方法测其吸光度值，根据公式计算出桂花的多糖含量。结果：采用苯酚-硫酸法对多糖的含

2、量进行了测定，测得平均结果为34%。结论：水提醇沉法制得桂花粗多糖；TLA法除去蛋白质得精制多糖。苯酚-硫酸法对其多糖含量进行测定，结果令人满意。关键词：桂花多糖提取分离中图分类号：R284文献标识码：A文章编号：1672-3791（2013）01（c）-0087-011仪器试剂1.1仪器RE-52A旋转蒸发仪器上海亚荣生化仪器厂SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵郑州长城科工贸有限公司UV-757CRT型紫外分光光度计7上海精密科学仪器有限公司KDM型调温电热套鄄城华鲁电热仪器有限公司1.2试剂分析醇95%

3、、固体氢氧化钠，无水乙醇、丙酮、三氯乙酸、苯酚、铝片、硫酸、葡萄糖、桂花、（以上试剂为分析纯）2实验方法2.1桂花多糖的粗提取2.1.1溶剂提取法从植物中提取多糖的常用方法是溶剂提取法。用水作溶剂时，可以用热水浸煮和冷水浸提提取多糖。或利用高浓度乙醇沉淀提纯不溶于高浓度乙醇的多糖；还可利用混合溶剂提取法对植物中不同的多糖进行分离。2.1.2多糖粗提过程三份桂花等量干燥品，加95%乙醇8、6、6倍量分别回流提取3h、3h、2h，药渣置通风处晾干，热水浴（90℃～100℃）10、8、8倍量依次提取3.5h

4、、2.5h、2h，过滤，合并滤液，浓缩至1/3，调含醇量至80%，静置过夜，抽滤得沉淀，依次用无水乙醇、丙酮洗涤，得粗多糖。2.2桂花多糖的精制2.2.1脱除蛋白质7本实验采用三氯乙酸法（TLA）。此法的不足是会引起某些多糖的降解。2.2.2脱色一般可用弱碱性树脂DEAE纤维素吸附色素，若被DEAE纤维素吸附可进行氧化脱色。2.2.3多糖的精制过程取粗多糖加水溶解至100ml，加入等体积30%三氯乙酸溶液脱蛋白，静置2h，离心，上清液用0.01mol/L氢氧化钠调pH=7，溶液减压浓缩至适当体积，用9

5、5%乙醇调含醇量至80%，放置，沉淀用无水乙醇，丙酮，无水乙醚依次洗涤，真空干燥，得除蛋白精制多糖。2.4桂花多糖的含量测定2.4.1苯酚-硫酸法原理多糖或寡糖被浓硫酸在适当高温下水解，产生单糖分子，并脱水成糠醛衍生物，衍生物在强酸条件下与苯酚起显色反应，生成橙黄色物质，在波长490nm处和一定浓度范围内，其吸光度A值与糖浓度C呈线性关系，从而可用比色法测定含量。2.4.2标准溶液的配制精密称取105℃下干燥至恒重的葡萄糖适量，配得试验浓度为0.08mg/ml的标准溶液。2.4.3供试品贮备液的配制精

6、密称取干燥的精制样品适量，配得试验浓度为0.087mg/ml的待测溶液。2.5测定条件选择2.5.1苯酚及硫酸用量选择分别吸取供试品液和对照品液测其A值，从苯酚液加入量达到某一值开始，A值基本保持不变，说明苯酚液量达到该值以上时，反应都能完成。另取根据A的稳定性，计算硫酸的最佳加入体积。3实验结果3.1多糖粗提称取三份等量的桂花药品标记为1、2、3号，以不同的条件进行回流。得三份滤渣，称三份重量。1号8.7900g。2号9.2158g。3号9.7766g。将三份药品以不同的条件提取，得三份滤液合并三份

7、滤液282ml。浓缩至1/3，即30ml。浓缩后，用80%乙醇沉淀出多糖，过滤得粗品4.0732g。3.2活性炭脱色使用活性炭粉末趁热过滤。结果表明，活性炭对桑椹多糖的脱色效果不明显。3.3多糖精制用三氯乙酸离心除去蛋白质后，得上清液约为1727ml。用浓度0.01mol/L氢氧化钠调溶液至中性。浓缩后，以80%乙醇沉淀出多糖，过滤得精品3.2139g。3.6标准溶液的配制对比试验证明，浓度0.08mg/ml的标准溶液，在紫外分光光度计490nm处，吸光度值线性效果最好。实验现象：多糖或寡糖生成橙黄色

8、物质。颜色随浓度增大而加深。3.7标准曲线的绘制3.7.1绘制原理用分光光度计在波长490nm处测定吸光度。以A值对浓度C绘制标准曲线，进行线性回归，得标准曲线方程：A=aC+b。回归方程：A=0.0125C+0.0162R2=0.99853.8待测溶液的配制待测溶液的配制方法与葡萄糖标准溶液的配制方法相同。实验现象：有橙黄色物质生成且颜色随浓度增大而加深。多糖含量%=CDf/W×100，式中C为样品溶液的葡萄糖的浓度（μg·ml-1），D为样品溶液的稀