熊果酸对急性肝损伤动物模型作用的研究.pdf

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1、福建医药杂志2014年8月第36卷第4期FujianMedJ，August2014，Vo1．36，No．4·63··实验研究·熊果酸对急性肝损伤动物模型作用的研究福建卫生职业技术学院(福州350101)林艳芹郑薇黄鹤光【摘要】目的研究熊果酸对肝损伤的保护作用，探讨其作用机制。方法采用四氯化碳(CC1)灌胃法建立小鼠肝损伤模型，用全自动生化分析仪检测血清ALT、AST，RT—PCR检测小鼠肝脏中孕烷x受体(PXR)、转移生长因子B(TGFB)和肿瘤坏死因子d(TNFa)基因表达量变化。结果熊果酸组(10、20、40mg／mL)能有效地降低血清ALT、AST水平，降低肝脏中TNFa的

2、表达，差异有统计学意义(P

3、具有镇静、消炎、抗菌、抗糖尿1．2．1模型建立及分组给药：昆明小鼠25只，雄病、降血糖等多种生物学效应l_2]。熊果酸具有明显性，清洁级，体质量(20．0±3．0)g，实验动物生的趋脂和抗纤维化作用，并能保护肝细胞膜及细胞产许可证号SCXK(闽)2010—0001，质量合格证号器的生物膜系统，使主动运输功能恢复正常，促进0000419，适应性喂养1周后，随机分为5组，即肝小叶中央区坏死肝细胞修复。笔者通过建立四氯空白组、模型组、熊果酸低剂量组(10mg／mL)、化碳(CC1)灌胃诱导的小鼠急性肝损伤模型，观熊果酸中剂量组(20mg／mL)、熊果酸高剂量组察熊果酸是否可以通过激活孕

4、烷X受体(PXR)的(40mg／mI)。药物均以花生油溶解。建立四氯化表达，而起到抵抗肝脏纤维化损伤的作用。碳(CC1)灌胃诱导的小鼠急性肝损伤模型，模型1材料与方法组、熊果酸组均灌胃给药，空白组不进行任何处1．1材料：1)试剂：熊果酸(南京替斯艾么中药理。前两周，各组均隔天CC1灌胃1次。后两周，研究院)；ALT、AST检测试剂盒(上海复星长各组均隔天熊果酸灌胃1次。末次灌胃后，小鼠禁征)；琼脂糖(上海生工)；PCR即用扩增试剂盒食24h。(上海生工)；DNAMarkerD(上海生工)；Trizol1．2．2样本采集：小鼠眼眶取血，放入1．5mL的(Invitrogen公司)；

5、4多聚甲醛(SOLARBIO)；Eppendor{管中，在4℃条件下1000rpm离心15RNA样品保存液(TIANGEN)；逆转录试剂盒min，分离上层血清。取上清于一2o℃冰箱保存；(TAKARA)；BioReadyrTaq(BioFlux)；dNTP肝脏取下后迅速称重，随后将小鼠的肝脏迅速泡人(上海生工)；焦炭酸乙二酯(DEPC)(鼎新恒信科含有0．5mL的RNAStore储存液的离心管中，立技有限公司)。2)仪器设备：冷冻离心机即放人一80℃冰箱，用于接下来的肝脏总RNA(Z323K，德国)；微电脑控制振荡培养箱(LRH一提取。250一zII，广东省医疗器械厂)；全自动凝

6、胶成像分1．2．3生化指标检测：全自动生化分析仪检测血析系统(JS一380A型，上海培清科技有限公司)；清中ALT、AST。全自动生化分析仪(迈瑞BS200，中国迈瑞公司)；1．2．4基因表达的检测：1)总RNA的提取：用电泳仪(DYY一6C型，北京市六一仪器厂)；可见TRIZOL法提取肝脏的总RNA，并取1LRNA，光分光光度计(SpectrumSP1105，上海光谱科技用分光光度计ND-1000检测RNA浓度。2)第一有限公司)；水平净化操作台(SP—DJ，上海浦东物链cDNA的合成：采用逆转录试剂盒(TAKA一1福建省肿瘤医院药剂科；2通信作者，福建医科大学协和l临床医学院

7、·64·福建医药杂志2014年8月第36卷第4期FujianMedJ，August2014，Vo1．36，No．4RA)，将小鼠肝脏总RNA反转录合成第一链cD—表2两组ALT、AST检测结果比较[IU／L，i士s]NA。反应条件为：37℃，15min；85℃，5S；一2O℃保存备用。3)目的基因编码区的PCR扩增：分别设计作为内参照的肌动蛋白(p—actin)，孕烷X受体PXR，肿瘤坏死因子aTNF—a和转化生长因子pTGF—p上游引物及下游引物，以第一链cD—NA为模板进行P