自制蝎毒提取仪对蝎毒提取和蝎毒蛋白含量的测定.pdf

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1、陕西农业科学2014，60(2)：33—35ShaanxiJournalofAgriculturMSciences自制蝎毒提取仪对蝎毒提取和蝎毒蛋白含量的测定何凤琴，尹伟。马海涛(西安文理学院生物技术学院，陕西西安710065)摘要：用自制蝎毒提取仪提取蝎毒，以蝎毒蛋白的含量为指标，用紫外分光光度法测定其含量，将测量出的结果与传统的凯氏定氮法测出的结果进行对比，其结果极为相近。说明自制蝎毒提取仪可用，分光光度法测量蝎毒蛋白，操作简单，实用性强。关键词：蝎毒；蝎毒蛋白；蝎毒提取仪；分光光度法；电激取毒法蝎子的主要功效在于蝎毒，蝎毒的功效是全1材料与方法蝎煎剂的18倍。研究表明，蝎毒主要由非蛋

2、白质部分和蛋白质部分组成。而蝎毒中的主要成份，1．1实验仪器自制蝎毒提取仪(已申请专利)、wFZ一800是具有药理学活性的蛋白质，其中包括一些具有特异功能细胞因子、神经因子、细胞毒蛋白和一些一DZ型紫外可见分光光度计、三角烧瓶、容量瓶、小烧杯、移液管、胶头滴管、精密电子称(精确到工具酶。蝎毒对冠心病、心肌梗塞、脑梗塞、动脉毫克以下)、大头针。硬化、风湿、肝病、高血粘稠、心脑血管疾病都有很1．2试剂好的治疗效果J。氯化氨(基准)，奈氏试剂(35g碘化钾和1．3成年活蝎在遇到激惹的状况下，出于防护或g氯化汞溶解于70mL水中，再加入30mL氢氧攻击的天性，会从毒囊中排出毒液。采集蝎毒就化钾溶液

3、)，聚乙二醇。是根据这个机理进行的。当前，常用的办法有剪1．3实验方法尾法、人工刺激法和电刺激法。剪尾法是直接剪1．3．1蝎毒的提取将盛有生理盐水的烧杯放下活蝎的尾节，采下整个毒腺。此法虽然简便、快在电子秤上放置数根大头针，然后电子秤归零；用速、采毒量大，但只能采毒1次，造成浪费；人工刺蝎毒提取仪刺激蝎子，用大头针刮取毒液放进食激法虽然克服了剪尾法的缺点，可以反复进行刺盐水中，读数。激，让蝎子不断产毒、排毒，也不损害蝎体的完整1．3．2标准曲线制备分别吸取氯化按溶液性，但工效低，安全性小，适于小规模养蝎；电刺激(80．0mg·L)0．0，0．2，0．4，0．6，0．8，1．0，1．2，1．

4、4mL置于25mL容量瓶中，先后加20mL聚乙法是在总结上述两种取毒方法的优缺点的基础二醇(0．1g·L)和1．0mL奈氏试剂，再用聚上，运用现代电子技术生产的一种既快速，又有较乙二醇稀释至25mL，摇匀。在460nm波长处测高采毒量的，且不影响取毒后全蝎加工的新的技定吸光度，不同体积的氯化按溶液分别测五次吸术生产的提取仪J。但目前市场上的提取仪主光度，取平均值。要应用电生理仪进行改造而成，成本高，价格较贵。我们实验室经过研究、探索研制了一套操作2结果简便，提毒效率高，成本较低的提取仪。用自制蝎2．1标准曲线的绘制毒提取仪提取蝎毒，以蝎毒蛋白的含量为指标，用2．1．1实验数据因氯化铵中含有

5、氮元素，蛋白紫外分光光度法测定其含量，将测量出的结果与质中氮元素含量稳定，故氯化铵溶液吸光度可作传统的凯氏定氮法测出的结果进行对比，以检测为蛋白质溶液吸光度对照。参考相关文献标提取仪的提毒功效。准氯化铵溶液0．0，0．2，0．4，0．6，0．8，1．0，1．2，收稿日期：2013—1O-22修回日期：2013一l1—2O基金项目：西安市科技计划项目一西安文理学院科研创新基金专项项目(CXY1134WL22)。第一作者简介：何凤琴(1968一)，女，西安人，西安文理学院生物技术学院副教授，主要从事动物养殖技术研究。陕西农业科学2014年第60卷第2期1．4mL会相当于含蛋白质0．0，0．1，

6、0．2，0．3，0．4，0．5，0．6，0．7mg，故得出表2。00OOOO表1分光光度法测氯化铵标准溶液65432l(m0L)2．1．2回归分析蛋白含量(mg)为横座标(蛋表4分光光度法测蝎毒吸光度白含量测定由一下公式计算)，吸光光度值(A)为纵座标，绘制标准曲线，并进行回归分析。·系列1一线性(系歹91)2．3．2蝎毒蛋白计算带入线性方程图1蝎毒标准溶液回归图y=0．7776x+0．0043得出：得出线性方程为：一只蝎子蛋白量X=0．0721Y：0．7776x+0．0043r=0．9880两只蝎子蛋白量X，=0．1874式中：y——吸光度值三只蝎子蛋白量X=0．2735x——蝎毒蛋白质

7、量蝎毒提取液中蛋白质所占百分比，代入公式W=X／G×100％r——相关系数式中：w——蝎毒提取液中蛋白质所占百分比；2．2测定蝎毒排毒量x㈤——测出蝎毒蛋白质量；每只蝎子取毒平均质量(表3)：(0．9+2．1+G——蝎毒提取液质量。2．9+4．3+5．2)÷(1+2+3+4+5)≈1．03mg得出：W=8．011％表3蝎毒质量W2=8．923％W3=9．431％三者结果进行对比发现极为接近，求其平均数W=8．788％3讨