J亚群禽白血病病毒gp85基因的原核表达及间接ELISA方法建立-论文.pdf

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1、第36卷第1期中国预防兽医学报Vo1．36．NO．12014年1月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJan．2O14doi：10．3969~．issn．1008—0589．2014．01．10J亚群禽白血病病毒gp85基因的原核表达及间接ELISA方法建立刘丽娜1,2，邵华斌，程国富，杨峻，张琳，谢华丽，栗绍文，罗青平(1湖北省农业科学院畜牧兽医研究所动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室，湖北武汉430064；2．华中农业大学动物医学院，湖北武汉430070)摘要：为建立检测J亚群禽白血病病毒(ALV．J)抗体间接

2、ELISA方法，本实验根据已发表的ALV—Jgp85基因序列设计一对特异性引物，以该病毒cDNA为模板进行PCR扩增，将目的基因克隆于pET一28a(+)栽体中，原核表达的重组蛋白约为381(u。经westernblot分析表明，重组蛋白gp85具有良好的反应原性。以纯化的重组蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA抗体检测方法，该方法对其它相关的禽类病原无交叉反应，其组内和组间的变异系数均低于13％，具有良好的重复性。对458份l临床血清样品进行检测，同时用IDEXX的同类ELISA抗体检测试剂盒进行对比，总符合率达到96．29％。本研究为ALv．J的流行病学调查提供了一

3、种简便的血清学诊断方法。关键词：J亚群禽白血病；gp85基因；蛋白表达；酶联免疫吸附试验中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008-0589(2014)01—0038—04DevelopmentofindirectELISAdetectingantibodyagainstavianleukosisvirussubgroupJwithgp85ascoatingantigenLIULi—na一，SHA0Hua—bin，CHENGGuo．fu，YANGJun，ZHANGLin，XIEHua—li，LIShao-wen2，LUOQing-ping(1．Insti

4、tudeofAnimalHusbandryandVeterinary，HubeiAcademyofAgriculturalSciences，HubeiKeyLaboratoryofAnimalEmbryoandMolecularBreeding，Wuhan430064，China；2．CollegeofVeterinaryMedicine，HuazhongAgriculturalUniversity，Wuhan430070，China)Abstract：ToestablishaindirectELISAmethodfordetectingantibodyagainsta

5、vianleukosisvirussubgroupJ(ALV—J)，thegp85geneofALV—JwasamplifiedbyRT—PCRandinsertedintopET一28a(+、vectorforexpressinginE．coliinducedby1PTG．Westernblotshowedthattheexpressedrecombinantgp85proteinwasabout38kuandrecognizedwithpositiveserum．Inaddition，theindirectELISAwasdevelopedwiththepurifi

6、edproteinascoatingantigen，andtheresultsshowedtheassaywasspecificityandrepeatability．Furthermore，atotalof458clinicalserumsamplesweredetectedbythisassayandtheagreementwas96．29％withcommercialELISAKit(IDEXX)．TheestablishmentoftheassaycouldbepotentiallyusedforepidemiologyinvestigationoftheALV

7、—Jinfection．Keywords：avianleukosisvirussubgroupJ；gp85gene；proteinexpression；ELISA*Correspondingauthor收稿日期：2012—06—27基金项目：湖北省科技计划研究与开发项目(2010BBB08、CARS一42一G11)作者简介：刘丽~(1984一)，女，宁夏银川人，硕士研究生，主要从事病原微生物学研究通信作者：E—mail：qingping0523@163．corn第1期刘丽娜，等．J亚群禽白血病病毒gp85基因的原核表达及间接ELISA方法