miR-34b在儿童急性白血病中的表达-论文.pdf

《miR-34b在儿童急性白血病中的表达-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第32卷第4期广东医学院学报Vb1．32No．45262014年8月J0URNALOFGUANGDONGMEDICALCOLLEGEAug．2014miR．34b在儿童急性白血病中的表达周君纯，郑丽，谭碧玉(1．广东省湛江市第二人民医院血液室，广东湛江524003；2．中山大学附属第六医院检验科，广东广州510655)摘要：目的了解儿童急性白血病中miR-34b的表达。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RQ．PCR)检测儿童初诊急性白血病(AL)患AL35例[其中急性淋巴细胞性白血病(ALL)25例、急性髓系白血病(AML)10例】和非恶性血液

2、病患JL2o例(对照组)的骨髓标本中miR．34b的表达水平。结果AL组、ALL组和AML组中的miR．34b相对表达量均明显低于对照组，差异有统计学意义(尸l<0．01)。结论miR-34b可能作为新的抑癌基因参与儿童初诊AL、ALL和AML的形成。关键词：儿童急性白血病；miR-34b；荧光定量聚合酶链反应中图分类号：R551．2文献标识码：B文章编号：1005．4057(2014)04—0526—02DoI：10．39698．issn．1005—4057．2014．04．045白血病是一类造血干细胞恶性克隆性疾病，严重威胁儿表1扩增合成c

3、DNA的miRNA序列童的健康和生命。研究发现【J。J，miR．34b在结直肠癌、胃基因名称基因序列癌、胰腺癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤中表达异常，而其是否U6snRNAGTGCTCGCTTCGGCAGCACATATACTAAAATTGGAACGA1'ACAGAGAAGATTAGCATGGC也在白血病的发生发展中发挥重要的调控作用，本文对此进CCCTGCGCAAGGATGACACGCAAATTCGTG行了初步研究，通过实时荧光定量聚合酶链反应(RQ．PCR)检AAGCGTTCCATATTTT测了miR．34b在儿童急性白血病(AL)中的表达水平，现

4、将结H8a—miR一34bUAGGCAGUGUCAUUAGCUGAUUG果报道如下。1，10×逆转录酶缓冲液1．5，RNA酶抑制剂0．19，1资料和方法无核酸酶纯水4．16gL，引物3gL，RNA模板5gL，混匀后放1．1一般资料人PCR仪进行扩增。扩增产物放人4℃冰箱冻存备用。骨髓标本取自2010年12月至2013年1月在湛江市第二1．2．4实时荧光定量PCR检测定量PCR检测各组miR一34b的人民医院初诊为AL的患JL35例，其中急性淋巴细胞性白血病表达水平，具体操作参照试剂盒说明书。20L反应体系如(ALL)25例，急性髓系白血病(AM

5、L)IO例。同时收集非恶性下：TaqManmiRNA分析试剂(20X)1．00uL，RT反应产物血液病患)L20例作为对照组。疾病诊断及疗效标准均按照急1．33，TaqMan2×通用PCR反应混合液10．o0，无核酸性白血病的分型诊断标准和《血液病诊断及疗效标准》(第酶纯水7．67，混合后，将反应管密封，短暂离心后放入定3版)进行判定_4J。量PCR仪检测。以U6snRNA为内参基因，miR．34b相对表达1．2方法量以公式2也Ac表示。1．2．1单个核细胞分离抽取骨髓2～5mL，肝素抗凝，标1．3统计学处理本采集后立即提取单个核细胞，用淋巴细

6、胞分离液(Ficol1分采用SPSS17．0软件进行统计处理，结果以Y-+-s表示，采离液)分离单个核细胞(MNC)。采用Trizol抽提细胞总RNA，用单因素方差分析法及Durmett检验，以P<0．05为差异有统计经紫外分光光度计测定A260／A280~k值，鉴定RNA纯度。学意义。A260／A280值在1．8r2上者，一80％冰箱保存备用。2结果1．2．2总RNA提取和定量将加入Trizol冻存于一80％冰箱的单个核细胞取出，按照常规RNA提取法，提取骨髓单个核AL组、ALL组和AML组中的miR．34b相对表达量均明显细胞RNA后于分光

7、光度计下行总RNA定量。低于对照组，差异有统计学意义(P<0．01)，详见表2。1．2．3eDNA合成应用美国ABI公司9600型普通PCR扩3讨论增仪合成cDNA两种miRNA序列，见表1。15uL反应体系：100mmol／LdNTPs(含dTTP)0．15IxL，MultiScribe逆转录酶研究表明，miRNAs的功能几乎涉及到生命发展的各个方面[3】，其中它在肿瘤中所发挥的作用使得它们成为目前乃至以后在肿瘤诊断、治疗等方面寻求新突破的重要关口。不收稿日期：2014．03—13；修订日期：2014．06．23同肿瘤中miRNAs的表达情况

8、与种类并不完全一样，通过分作者简介：周君纯(1972一)，男，本科，副主任技师。析比较肿瘤组织及其来源相关的正常组织可以发现表达存在第32卷第4期广东