贵州铜仁产广谱抑菌作用细菌素乳酸菌的筛选及鉴定-论文.pdf

《贵州铜仁产广谱抑菌作用细菌素乳酸菌的筛选及鉴定-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、第l6卷第4期铜仁学院学报Vo1．16，No．42014年7月JournalofTongrenUniversityJuI．2014贵#IN仁产广谱抑菌作用细菌素乳酸菌的筛选及鉴定胡美忠，张新卓，刘芸(铜仁职业技术学院，贵州铜仁550025)摘要：从贵州铜仁产发酵食品中分离纯化出70余株乳酸菌，采用Agar。spot—test初筛与排除酸、过氧化氢抑制后复筛出一株能产广谱抑菌作用细菌素的乳酸菌(编号G55)，经生理生化及16SrDNA鉴定可知G55为植物乳杆菌。抑菌谱实验表明，G55产生的细菌素能抑制革兰阳性菌及革兰阴性菌的生长；蛋白酶实验表明，G55产生的细菌素对胃

2、蛋白酶、蛋白酶K敏感，对胰蛋白酶、0【凝乳蛋白酶部分敏感。关键词：植物乳杆菌；广谱抑菌；细菌素中图分类号：TS201．3文献标识码：A文章编号：1673—9639(2014)04。0032—05乳酸菌细菌素指由乳酸菌代谢产生的一类小分素从而抑制了其他腐败菌的生长繁殖。从这些食物子多肽，少部分乳酸菌细菌素具广谱抗菌作用，且中的乳酸菌筛选广谱高效的乳酸菌细菌素，具有极来源安全，故乳酸菌细菌素有用于食品添加剂、饲大优势。料添加剂、医药等方面的潜力【l’21。筛选新的高效广谱乳酸菌细菌素成为近年来全1．材料与方法世界范围内的一个热门研究方向。各种新的乳酸菌1．1．材料与试剂

3、细菌素不断被科学家分离筛选出来，国际上已发现样品：贵州省铜仁市农户家自制酸萝l-、酸白且鉴定出的数十种乳酸菌细菌素，分别是由乳球菌、菜、酸辣椒共计5份。片球菌、明串珠菌、乳杆菌、双歧杆菌、肠球菌、培养基：MRS培养基【3】，牛肉膏蛋白胨培养基链球菌、肉食杆菌等属的菌株产生的，能对李斯特(NA)，生理生化鉴定培养基【4J。菌等致病菌及食品腐败菌产生抑制作用。但是，更指示菌：金黄色葡萄球菌(ATCC25923)，大肠多特殊生境下生长的优良乳酸菌细菌素还未被分离杆菌(ATCC25922)，短小芽孢杆菌(CMCC63202)，筛选出来。蜡样芽孢杆菌(AS1．1846)，藤黄

4、微球菌(CMCC贵州地处云贵高原，地势西高东低，境内山脉28001)，大肠杆菌(ATCC25922)，绿脓杆菌(AS众多，重峦叠嶂，绵延纵横，山高谷深，其独特的1．2620)，荧光假单胞菌(AS3．6452)。喀斯特地貌孕育了丰富的微生物菌群，最具特色的主要试剂：革兰氏染色试剂盒(杭州百思生物就是贵州黔东南地区的酸味食品。凯里能保存数年技术有限公司)，细菌基因组提取试剂盒(Bacterial而不变质的酸肉和远近闻名的酸汤，镇远的陈年道DNAKit(200)，OMEGA)，TaqtmDNA聚合酶菜，铜仁的酸菜鱼，贵州四处可见的酸萝卜、酸白(TaKaRa)，GelExt

5、ractionKit(TaKaRa)，由Sigma菜等等，这些食物没有加入防腐剂但是能长时间保生产的过氧化氢酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、蛋白酶K、存而不变质，很大原因是因为乳酸菌发酵产生细菌0【．凝乳蛋白酶。收稿日期：2014．05．09作者简介：胡美忠(1981-)，男，湖南衡阳人，博士，副教授，研究方向：食品微生物，天然产物化学。第4期胡美忠，张新卓，刘芸：贵州铜仁产广谱抑菌作用细菌素乳酸菌的筛选及鉴定331．2．实验方法液分别用琼脂扩散法测试其对短小芽孢杆菌(CMCC1．2．1．乳酸菌的分离63202)，蜡样芽孢杆菌(AS1．1846)，金黄色葡萄球样品增菌培养后

6、，采用10倍稀释法涂布培养于菌(ATCC25923)，大肠杆菌(ATCC25922)，绿脓添加了0．3％碳酸钙的MRS固体培养基，随机挑取出杆菌(AS1．2620)，荧光假单胞菌(AS3．6452)的现溶钙圈的菌落，继续划线分离纯化，重复几次，抑菌活性。最后得到溶钙圈明显，菌落形态单一的单菌落。挑1．2．4．种属鉴定取单菌落，进行革兰氏染色及过氧化氢酶测试，革生理生化鉴定：经过初筛、复筛，得到一株能兰氏染色阳性，过氧化氢酶阴性的菌落初步判定为产广谱抗菌作用细菌素的菌株，编号为G55。根据乳酸菌，用添加了25％甘油的MRS培养基于一70"C《伯杰氏系统细菌学手册》【1

7、UJ及《乳酸细菌分类鉴下保藏待用L5J。定及实验方法》[4】，菌株G55从形态、产氨、产酸产1．2．2．产广谱抗菌作用细菌素乳酸菌的初筛气、运动、产硫化氢、碳水化合物发酵几个方面进以金黄色葡萄球菌(ATCC25923)，大肠杆菌行生理生化鉴定。(ATCC25922)为指示菌，采用agar-spottest初步分子生物学鉴定：按细菌基因组提取试剂盒筛选乳酸菌产抗菌活性物质【6】。(BacterialDNAKit(200)，OMEGA)操作说明提1．2．3．产广谱抗菌作用细菌素乳酸菌的复筛取G55总DNA，以16SF：抗菌能力的筛选：对初筛出来的菌株发酵培养5一AG