马铃薯帚顶病毒RT-LAMP检测方法的建立-论文.pdf

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1、2014年第5期植物检疫PLANTQUARANTINEVo1．28No．5马铃薯帚顶病毒RT—LAMP检测方法的建立丁小兰赵竹马占鸿张永江何增磊李明福’(1．中国农业大学农学与生物技术学院北京100193；2中国检验检疫科学研究院)DetectionofPotatomop-topvirusbyreversetranscriptionloop·mediatedisothermalamplification．DingXiaolan，ZhaoZhu。，MaZhanhong，ZhangYongjiang，HeZenglei，LiMingfu2(1．C

2、hinaAgriculturalUniversityBeijing100193China；2．ChineseAcademyofInspectionandQurantine)AbstractPotatomop-topvirus(PMTV)isoneofthemostimportantpathogensofpotatoes．Inthisstudy，areversetranscriptionloop-mediatedisothermalamplification(RT-LAMP)methodwasdevelopedforthedetectionof

3、PMTV．ThreeprimersetsweredesignedbasedonthehighlyconservedregionoftheTGBsequenceofPMTV．Aftertheoptimizationofprimersandreactionconditions，theRT-LAMPmethodwasspecificandsensitiveindetectingPMTV，thereactionwas100timesmoresensitivethanPCR．Thedetectionresultcanbejudgedbyvisualob

4、servationofturbidityOrcolorreactionwithoutcomplexequipments．ThisstudywillprovidearapidandsensitivediagnosticmethodtodistinguishPMTVinpotato．KeywordsPotatomop—topvirus；RT-LAMP；detection摘要马铃薯帚顶病毒(Potatomop—topvirus，PMTV)是马铃薯上的重要病毒之一。本研究利用逆转录环介导等温扩增技术，建立了PMTV的RT-LAMP检测方法。根据PMT

5、V高度保守的TGB序列设计了3组引物，进行引物筛选和条件优化。建立的RT-LAMP检测方法特异性强、灵敏度高，比PCR灵敏度高100倍，并可通过肉眼观察浊度或颜色反应进行结果判断。本研究为PMTV的检测提供了快速、灵敏的检测方法。关键词马铃薯帚顶病毒；逆转录环介导等温扩增技术；检测中图分类号S41．30马铃薯帚顶病毒(Potatomop-topvirus，PMTV)州、江西、浙江、云南、甘肃等地均有报道[3】。由于属于帚状病毒科(Hrgaviridae)马铃薯帚顶病毒属PMTV可以在马铃薯粉痂菌的休眠孢子中保持长(Pomovirus1，主要分

6、布在爱尔兰、丹麦、芬兰、挪时间的侵染力以及目前缺少有效的抗病品种，该威、荷兰、英国、捷克、日本、美国和加拿大等国家病毒病很难被控制_1]。近年来，我国多次从马铃⋯薯起源中心地区如秘鲁、智利等引进马铃薯品种。PMTV严重影响马铃薯的产量和品质，受侵染的马铃薯块茎产生环状或弧状坏死，由病薯长资源，也从荷兰、英国、美国等马铃薯产业强国引成的马铃薯植株表现出帚顶、奥古巴花叶和褪绿进种薯、组培苗，PMTV传入风险大，若其一旦传v型纹等症状[21。鉴于PMTV的严重危害，我国入国内，将会给我国马铃薯产业造成巨大损失，必将其列入《中华人民共和国进境植物检疫

7、性有害须引起重视。生物名录》。针对PMTV的检测，己建立的方法有ELISAt钔RT-PCR~”PMTV可随病薯块或组培苗通过运输远距、、实时荧光RT-PCR【、基因离传播，在田间可以通过土壤中的马铃薯粉痂菌芯片等。LAMP技术是日本学者NotomiT等(Spongosporasubterranea)近距离传播。该病毒于2000年开发的-~o0新型的核酸扩增方法[8]，具的传播介体马铃薯粉痂菌在我国内蒙古、广东、贵有简便、快速、特异性强等特点，已用于感染人类基金项目：国家质量监督检验检疫总局行业标准(2011B466r)通讯作者：E-mail：

8、limf9@sina．tom收稿日期：2014—03—20·59·2014年第5期植物检疫PLANTQUARANTINEVo1．28No．5及动植物的细菌、真菌、寄