银中杨叶片离体再生体系的建立及Gt5GT7基因的遗传转化-论文.pdf

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1、144广东农业科学2014年第13期银中杨叶片离体再生体系的建立及Gt5GT7基因的遗传转化徐洪伟，高峰，杨伟新，王晶，周晓馥(吉林师范大学植物资源科学与绿色生产吉林省重点实验室，吉林四平136000)摘要：以银中杨幼嫩枝条为外植体，探究不同预培养方式、激素配比对其叶片离体再生体系的影响。结果表明，枝条在MS营养液中预培养3d为最优方式；不定芽诱导最佳培养基为MS+TDZ0．1mg／L+NAA0．02mg／L，叶片可不经历愈伤组织直接形成丛生芽，最适生根培养基为1／2MS+NAA0．05mg／L+IBA0．0lm

2、g／L+活性炭0．6g／L。利用发根农杆菌介导法，建立Gt5GT7基因的银中杨叶片遗传转化体系，叶片GUS染色结果初步证明，Gt5GT7基因成功整合入银中杨叶片，且最适宜侵染的菌液A值为0．45～0．6。关键词：银中杨；预培养；激素配比；离体再生；Gt5GTI；遗传转化中图分类号：$792．11；Q785文献标识码：A文章编号：1004—874X(2014)13—0144—03LeaflinvitroregenerationandGt5GT7gReneticCtransformationinPopulusalba

3、xP．berolinensisXUHong-wei，GAOFeng，YANGWei—xin，WANGJing，ZHOUXiao-fu(KeyLaboratoryofJilinProvinceforPlantResourcesScienceandGreenProduction，JilinNorm~University,Siping136000，China)Abstract：TakingyoungbranchesofPopulusHbaxRberolinensisasplantmaterial，effectsofpr

4、e—cultures，eytokinin／auxinratiooninvitroregenerationwereinvestigated．Resultsshowedthatpre-cuhuredinMSliquidmediumfor3dwastheoptimalmethod．ThemostsuitablebudinductionmediumwasMS+TDZ0．1mg／L+NAA0．02mg／L，inwhichmuhiplebudscoulddirectlyform．Theoptimalrootingmedium

5、was1／2MS+NAA0．05mg／L+IBA0．O1mg／L+activecarbon0．6g／L．Moreover，Gt5GT7genewastransformedintoregenerativeleavesmediatedbyAgrobacteriumrhizogenesis．GUSstainingillustratedthattransformationsystemwassuccessfullyestablished．Moreover．theoptimalA600was0．45—0．6．Keywords

6、：Populusalba×Pberolinensis；pre—culture；cytokinin／auxinratio；invitroregeneration；Gt5GT-I；genetictransformati0n杨树是工业中重要的资源，在生物和农业系统中扮道较少。宁涛等[61研究认为，银中杨茎段最佳芽诱导培演重要角色。银中杨(PopulusalbaxPberolinensis)是以养基为1／2MS+6一BA1．O0mg／L+NAA0．05mg／L：刘红银白杨(PbaLinn)为母本、中东杨(beroline

7、nsis梅同则指出，MS为银中杨茎段组织培养的最适基本培Dipp．)为父本杂交选育的雄性无絮品种_l_。其具有树干通养基，各激素对诱导不定芽的作用大小为TDZ>6一BA>直、材质细密、速生、抗病抗虫能力强、耐寒、耐瘠薄等优KT；姜长吉等嘲研究结果表明，MS+6一BA1．5mg／L+NAA良特性，是北方城市绿化的首选树种。银中杨雄性不育，0．05mg／L使侧芽的增殖效率最高。扦插繁殖成活率低，速度慢，长期扦插容易引起品种退花色苷是黄酮类色素，能调节植物基因表达和酶化。因此，组织培养成为银中杨繁育的首选方法。活性，保

8、护植物免受病虫和不良环境伤害，预防心脑血影响杨树组培的主要因素有基因型嘲、外植体[31、培管疾病，去除多余自由基，抗氧化、抑制细胞癌等。养基、激素配比【51。关于银中杨的组织培养，国内外报UDP一葡萄糖：花色苷5-0一葡糖基转移酶(5GT)参与花色苷生物合成，催化其最终生成更稳定的花色苷。本研收稿日期：2014—03—02究利用基因工程法，将目的基因花色素苷5-0一葡糖基