猪细小病毒HLJ—DN株分离鉴定-论文.pdf

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1、第45卷第6期东北农业大学学报45(6)：74-782014年6月JournalofNortheastAgriculturalUniversityJune2014网络出版时间2014—6一I116：15：07【URL]http：／／www．cnki．net／kcms／detai]／23．1391．S．20140613．0948．001．html猪细小病毒HLJ—DN株分离鉴定刘秀芬L，姜艳平，唐丽杰，李一经(1．东北农业大学动物医学学院，哈尔滨150030；2．湖北科技学院医药研究院，湖北咸宁437100)摘要：按照常规病毒分离方法，从黑龙江省某猪场怀孕母猪

2、所产死胎的肝脏中分离到一株病毒。利用sT细胞进行培养，通过血细胞凝集试验、间接免疫荧光试验及电镜观察等对新分离毒株进行鉴定。结果表明，该病毒能在sT细胞上生长并引起明显拉网状细胞病变，按Reed—Muench法计算出TCID。为10-4．6~0．1mL-；通过电镜观察可见直径约为20nm无囊膜的病毒粒子，该病毒能凝集0．5％的豚鼠红细胞，免疫荧光试验显示在细胞上出现明显荧光，能与特异性抗体发生反应。对基因进行扩增及测序并与GenBank已发表PPV毒株序列进行比对分析，结果显示该毒株与WB一143株在同一个分支里，同源性高达到99．8％，说明分离的病毒为猪细

3、小病毒，命名为HLJ—DN，该病毒的分离为研究当地猪细小病毒的流行、预防和治疗奠定。关键词：猪细小病毒；ST细胞；分离鉴定；基因中图分类号：$823文献标志码：A文章编号：1005—9369(2014)06—0074—05刘秀芬，姜艳平，唐丽杰，等．猪细小病毒HLJ-DN株分离鉴定【J】．东北农业大学学报，2014，45(6)：74-78．LiuXiufen，JiangYanping，TangLijie，eta1．IsolationandcharacterizationofporcineparvovirousstrainHLJ-DN[J]．Journalof

4、No~heastAgriculturalUniversity,2014，45(6)：74—78．(inChinesewithEnglishabstract)IsolationandcharacterizationofporcineparvovirousstrainHLJ-DN／uuXiufen他，JIANGYanping’，TANGLijie’，LIYijing’(1．SchoolofVeterinaryMedicine，NortheastAgriculturalUniversity,Harbin150030，China；2．MedicineResearch

5、InstituteofHubeiUniversityofScienceandTechnology,XianningHubei437100，China)Abstract：Thisresearchseparatesavirusfr0mtheliverofnaturalinfectionpregnantSOWSstillbirthfr0mafarminHeilongjiangProvince．thisviruscangrowintheSTcellsandleadtoanobviouspathologicalchangesinreticuLarcel1．Accord

6、ingtotheReedMuenchmethodwecancalculafedtheTClD50iS10·0．1m：ByelectronmicroscopewecanobservesomevirusparticleswithoutposteriorcapsuLeandtheirdiameterisabout20nm，theviruscanagglutinate0．5％RBCofguineapig，immunofluorescencetestshowedasignificantfluorescenceinthecells，theycanreactwithspe

7、cificantibody，atthesametimewedothegeneamplificationandsequencing．wefindthesequencealignmentiscorrect．TheresultsshowthestrainandWB-143strainarethesamebranch，upt099．8％homology．TheseresultsiIlustratedthattheseparationvirusisporcineparvovirus，itnamedHLJ-DN．Keywords：porcineparvovirus；ST

8、cellline；isolationandchara